CD200在AA患者T淋巴细胞上的表达及其与血清中相关细胞因子浓度的关系①

张慧敏 刘清池 潘 邢江涛 张玉娜 (石家庄平安医院,石家庄 050021)

再生障碍性贫血(Aplastic anemia,AA,简称再障)是一组由于物理、化学、生物因素或不明原因引起的骨髓造血功能衰竭的异质性疾病。第46届美国血液学年会明确提出AA是自身免疫性疾病,机体免疫调节机制紊乱在AA发病中起重要作用,大量研究显示细胞免疫功能紊乱与造血衰竭密切相关[1]。AA发病中免疫激活的同时伴有免疫耐受的打破[2]。CD200分子是一种新发现的具有免疫调节功能的分子,与CD200R相互作用能使IL-2、IFN-γ等1型细胞因子生成减少,IL-4、IL-10等2型细胞因子生成增多[3],由此来干预Th细胞的生成与分化,促进免疫耐受。本研究采用流式细胞术检测了60例AA患者和30名健康人外周血T淋巴细胞亚群上CD200的表达率,用ELISA 法检测了血清中 IL-2、IFN-γ、IL-4、IL-10的浓度,以探讨CD200在AA发病中的作用。

1 对象与方法

1.1 研究对象 重型再障(SAA)30例、非重型再障(NSAA)30例,男28例,女32例,中位年龄 32.6岁(7～62岁);30名健康志愿者作为正常对照组(NC),男13例,女17例,中位年龄37岁(21～58岁)。

1.2 主要仪器及试剂 四色流式细胞仪及抗CD3、CD4、CD8单克隆抗体为美国Beckman Coulte公司生产;抗CD200单抗购自美国Invitrogen公司;MK3型酶标仪及自动洗板机为芬兰雷勃公司生产;ELISA试剂盒(IL-2、IL-4、IL-10、IFN-γ)购自上海西唐生物科技公司。

1.3 方法

1.3.1 标本的采集 抽取静脉血8 ml,其中5 ml用EDTA抗凝,检测CD200表达率;3 ml收集血清,冷冻保存,待测相关细胞因子浓度。

1.3.2 CD200测定方法 用淋巴细胞分离液分离EDTA抗凝血样本中单个核细胞(PBMC)。向顺序编好号的试管中加入单克隆抗体各10 μ l,加入PBMC悬液100 μ l,室温避光孵育20分钟,溶血,加入PBS缓冲液,离心。……