氯沙坦对实验性肾衰RAS系统的影响

李冬梅,姜海荣,宓宇仙,孙连坤,杨 柳

(1.吉化集团公司总医院特诊科,吉林吉林市 132022;2.吉林大学基础医学院)

氯沙坦对实验性肾衰RAS系统的影响

李冬梅1,姜海荣1,宓宇仙1,孙连坤2,杨 柳1

(1.吉化集团公司总医院特诊科,吉林吉林市 132022;2.吉林大学基础医学院)

目的探讨血管紧张素受体拮抗剂氯沙坦(ARB)对血管紧张素受体亚型1(AT1)、血管紧张素受体亚型2(AT2)、血管紧张素转化酶(ACE)、血管紧张素原(AGT)基因表达的影响。方法本试验应用阿霉素(ADR)复制肾衰大鼠模型,采用RT-PCR检测AT1、AT2、ACE、AGT基因表达。结果肾衰组肾脏 AT1表达上调,AT2降低,氯沙坦组转为AT1下调,AT2表达接近对照组水平;与对照组相比,肾衰模型AGT水平增高,而给予氯沙坦后其水平降低;ACE在肾衰时表达上调,给氯沙坦后降低但仍高于对照组水平。结论氯沙坦可从调节血管紧张素II(Ang II)生成及受体水平角度对抗AngⅡ的作用,从而避免肾损伤。

氯沙坦;肾损伤;RAS系统

(Chin J Lab Diagn,2010,14:1378)

肾素-血管紧张素系统(RAS)在肾脏疾病的发生、发展中起重要作用,日益受到人们的关注。血管紧张素Ⅱ是RAS系统的主要活性物质,其作用主要由AT1受体介导。阻断AT1受体能够阻断血管紧张素Ⅱ的作用,进而阻断RAS活性。血管紧张素受体拮抗剂对肾脏保护作用,但对其是否影响AT1受体等RAS成分的表达尚未见报道。因此,本研究应用阿霉素复制肾衰大鼠模型,观察血管紧张素受体拮抗剂氯沙坦对AT1、AT2、ACE、AGT基因表达的影响,从而探讨RAS在肾衰发生发展过程中的作用。

1 材料与方法

1.1 肾衰大鼠模型建立和检测方法

实验动物48只适应1周,自由饮水进食,测体重后随机分组。A组16只为正常对照组,余32只按阿霉素肾衰模型方法造模。于给药后第5周,将造模大鼠随机分为治疗组(B组)16只,对照组(C组)16只。B组给予氯沙坦1.2 mg/只/次灌胃,1次/d,C组给予同等量生理盐水灌胃,1次/d。所有动物均连续给药2周,于治疗结束后,在腹腔麻醉下摘取出双肾冻于-80℃,RT-PCR检测RAS系统相关基因的表达变化。

1.2 统计学方法

2 结果

2.1 检测肾衰大鼠血清中尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)含量 见表1。

表1 各组大鼠血清中 BUN、Cr的含量(±s)

表1 各组大鼠血清中 BUN、Cr的含量(±s)

*P＜0.05,与对照组比较;#P＜0.05,与ADR组比较。

组别 BUN(mmol/L) Cr(mmol/L)对照组 8.78±2.45 32.05±4.81 ADR组 12.46±1.56* 44.17±4.16*ADR+ARB组 10.34±1.82# 34.51±4.28#

2.2 肾衰大鼠肾组织AT1,AT2,ACE,AGT mRNA的表达 见图1-图4。结果显示,肾衰组肾脏AT1表达上调,AT2降低,氯沙坦组转为AT1下调,AT2表达接近对照组水平;与对照组相比,肾衰模型血管紧张素原(AGT)水平增高,而给予氯沙坦后其水平降低;血管紧张素转化酶(ACE)在肾衰时表达上调,给氯沙坦后降低但仍高于对照组水平。

图1 RT-PCR检测大鼠肾脏A T1 mRNA的表达

图2 RT-PCR检测大鼠肾脏AT2 mRNA的表达

图3 RT-PCR检测大鼠肾脏ACE mRNA的表达

图4 RT-PCR检测大鼠肾脏AGT mRNA的表达

3 讨论

在整个血管紧张素系统(RAS)中,血管紧张素原(AGT)通过肾素转变成血管紧张素Ⅰ(Ang I),血管紧张素Ⅱ(Ang II)是Ang I通过血管紧张素转化酶(ACE)的酶解作用生成的,是RAS主要活性肽,其主要作用是收缩血管[1]。Ang II的大多数作用是通过与AT1R结合来实现的,AT1受体介导包括动脉血压、电解质、水平衡、口渴、激素分泌和肾功能的调节[2]。AT1受体广泛分布于哺乳动物的大脑、肾上腺、心脏、血管、肾脏、肝脏等组织和器官,属G蛋白耦联受体超家族的一员,具有7个跨膜区域以及与G蛋白耦联的羧基终端[3]。AT2R与AT1R的结构差异较大,两者之间只有32%-34%的氨基酸序列相同[4]。关于AT2R的功能目前尚未完全阐明,近年来的研究表明,AT2R的部分作用与AT1R相反,其主要功能抑制细胞生长、细胞分化,并介导血管扩张[5]。AT2受体仅分布于肾上腺、心脏、脑(神经元)、子宫、卵巢、肾脏和肺脏等,

ATR拮抗剂主要有AT1RA及AT2RA,目前研究较多的是AT1RA。AT1RA发挥肾保护作用的主要机制是对AT1受体的阻断,但进一步研究发现,AT1RA还能增加血浆中肾素和Ang水平,加大了Ang II与AT2R的结合,发挥抗增殖作用。AT1RA具有改善肾血流动力学、减轻肾血管阻力、选择性扩张出球小动脉、降低肾小球内压力、减少蛋白尿、防止肾间质纤维化、促进尿酸排泄等作用。ATR拮抗剂广泛用于多种原发性及继发性肾病的治疗[6]。

氯沙坦是第一个上市(1990年开发)的口服非肽类AT1受体拮抗剂,具有高效、长效、低毒的特点。AT1受体拮抗剂的临床应用包括:1)治疗高血压病:AT1受体拮抗剂阻断了Ang II所致的外周血管收缩、交感神经兴奋和压力感受器敏感性增加等作用,从而产生降压作用。许多临床试验已证明单独使用AT1受体拮抗剂对轻、中度高血压病有效[7-8]。其降压作用与钠的摄入无关,不影响心率,不改变肾小球滤过率,略微增加肾血流,增加尿钠和一过性尿钾排出,增加尿酸排出[9]。2)治疗充血性心力衰竭:AT1受体拮抗剂通过阻断RAS的作用,可降低周围血管阻力,增加静脉顺应性,降低左心室舒张末期压力,从而减缓心力衰竭的发展,降低心力衰竭的病死率[7]。3)抗心室肥厚:AT1受体拮抗剂通过阻断Ang II受体,有利于心肌肥厚的缓解。4)治疗心肌梗死:现已有报道AT1参与心室重塑。目前正在进行有关洛沙坦和缬沙坦对心肌梗死合并左心功能衰竭的干预性试验研究,预计结果将于近年揭晓[7]。5)治疗糖尿病肾病:丁鹤林等研究显示[8],洛沙坦处理过的STZ糖尿病大鼠,其糖尿病肾病的发生延缓,同时降低肾组织3型基质金属蛋白酶mRNA的表达。

阿霉素主要通过氧化应激等方式诱导肾功能衰竭。本研究证明肾衰发生发展过程中,ANG II生成增加,AT1信号通路活性增强,AT2信号通路活性降低,说明阿霉素诱导肾功能衰竭过程中,主要通过AngⅡ与AT1结合,增强其缩血管作用而影响肾脏血流动力学促进肾脏病的进展。肾衰时AT2下调使其功能减弱,可经减少肾血流方式促进了肾组织损伤。氯沙坦为AngⅡ受体拮抗剂,竞争性抑制AngⅡ与其受体结合,且主要与AT1结合,可阻断Ang II引起的血管收缩、交感兴奋、醛固酮分泌增多等作用。因而可以缓解肾损伤。此外,本研究结果亦证明氯沙坦可从调节受体水平角度对抗AngⅡ的作用。

综上所述,本研究在经ADR复制肾衰大鼠模型前提下,主要研究RAS系统成分肾衰发生发展过程中的作用。肾衰组RAS的水平及活性变化直接与肾损伤相关,拮抗肾RAS可保护肾组织。本研究结果充分显示RAS在肾衰发生发展过程中的作用,针对RAS的研究可将其作为药物作用新靶点,有助于开发新的肾脏疾病治疗药物。

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Effects of Losartan on renin-angiotensin system in the kidney of experimental renal failure

LI Dong-mei,JIANGHai-rong,MI Yu-xian,et al.(The hospital of chemicalindustry company,Jilin city132022,China)

ObjectiveTo explore the mRNA expression of AT1,AT2,ACE and AGT was determined with RT-PCR method.MethodsIn this study,after the rat model of renal failure was established by administrating with ADR.ResultsRT-PCR results showed that adriamycin inducted that upregulation of AGT,ACE and AT1,and down-regulation of AT2,but the down regulation of AGT,AT1 when adriamycin administration.ConclusionARB can competitively inhibit the acitivity of ANG II through binding with AT1,or down regulate the expression of ANG II receptor,it can protect the kidney from the injury.

Losartan;renal failure;RAS system

R961

A

1007-4287(2010)09-1378-03

2009-11-14)