促肾上腺皮质激素释放激素基因敲除小鼠的繁殖与基因型鉴定*

王海燕,刘 庆,钟河江,杨 策,黄苏娜,严 军,蒋建新

(第三军医大学大坪医院野战外科研究所第四研究室/全军交通医学研究所/全军交通伤重点实验室/创伤、烧伤与复合伤研究国家重点实验室,重庆 400042）

促肾上腺皮质激素释放激素(corticotropin-releasing hormone,CRH)是下丘脑-垂体-肾上腺(hypothalam ic-pituitaryad renal,HPA)轴最重要的调节因子之一,能刺激垂体前叶促肾上腺皮质激素(ad renocorticotropic hormone,ACTH)细胞的阿黑皮素原(proopiomelanocortin,POMC)基因表达,调控机体糖皮质激素分泌水平[1-3]。作为研究应激后神经内分泌反应和天然免疫功能关系的重要模式动物,CRH基因敲除(knockout,KO)小鼠为进一步研究内源性CRH在免疫系统及炎症反应中的作用提供了有力的工具[4-5]。然而,国内利用CRH KO小鼠进行相关研究的报道还不多。由于CRH KO小鼠的饲养和繁殖难度与常规小鼠不同,而获取一定数量的CRH KO小鼠是探讨HPA轴在神经内分泌反应中作用的前提和基础,因此,本课题在引进CRH KO小鼠的同时,对该模式动物的饲养、保种和基因分型等方面的特点和规律进行了探讨。

1 材料与方法

1.1 实验动物 CRH KO杂合子型(CRH+/-)小鼠(雄鼠5只、雌鼠2只)购自美国 Jackson实验室。

1.2 基因敲除小鼠的建立 亲代杂合子小鼠为C57BL/6J种系背景。通过同源重组的方式将来源于129S2/SvPas小鼠的胚胎干细胞-D3株(embryonic stem cells-D3,ES-D3)中的目的基因(CRH)进行突变,再将突变的胚胎干细胞(embryonic stem ce lls,ES)注射入C57BL/6J小鼠胚胎中以获得嵌合小鼠,通过对嵌合小鼠近交繁殖获得杂合子型(CRH+/-)、野生纯合子型(CRH+/+)及CRH KO纯合子型(CRH-/-)小鼠。

1.3 CRH KO小鼠的饲养与繁殖 CRH KO小鼠的饲养和繁殖按照无特定病原(specific pathogen free,SPF)级动物饲养标准在层流隔离环境饲养,室内温度控制在20～26℃,湿度50%～60%,照明采取12 h昼夜交替的方式。……