实验室内不同检测系统比对周期及比对方案探讨

阳 苹,张莉萍,肖 勤,毕小云,邓小玲

（重庆医科大学附属第一医院检验科 400016）

不同检测系统测定结果的一致性研究已成为关注的焦点,检验结果互认是检验界追求的目标,也成为服务对象所关注的问题。ISO15189（医学实验室质量和能力认可准则）明确要求[1]：当同样的检验应用不同程序或设备,或在不同地点进行,或以上各项均不同时,应有确切机制以验证在整个临床适用区间内检验结果的可比性,应按适合于程序和设备特性的规定周期验证。

要使不同医院的检验结果具有可比性,首先要保证医院内部不同检测系统的结果具有可比性[2],本室现有两台AU系列生化分析仪用于常规生化检测,为符合ISO15189相关要求,保证不同检测系统相同检验项目结果的一致性,本室参考美国国家临床实验标准委员会（NCCLS）的EP9-A2文件建立了一套比对方法,包括标准比对方案和常规比对方案,现报道如下。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 仪器与试剂 Olympus AU5400、Olympus AU640生化分析仪。丙氨酸氨基转移酶（AST）、天门冬氨酸氨基转移酶（ALT）、碱性磷酸酶（A LP）、γ-谷氨酸氨基转移酶（GGT）、葡萄糖（GLU）采用Olympus配套试剂、校准品和质控品；总蛋白（TP）、清蛋白（ALB）、总胆红素（TB）、胆固醇（TC）、三酰甘油（TG）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、尿素（Urea）、肌酐（Cr）、尿酸（UA）采用日本WAKO试剂、校准品和质控品。

1.1.2 样本 本院体检、住院或门诊患者新鲜血清。

1.2 方法

1.2.1 标准比对方案 参考EP9-A2[3]文件进行,比对周期为每半年一次。比对前对两台仪器进行保养,确保处于最佳状态,在室内质控在控的前提下进行方法学比较。连续5d每天收集8份新鲜血清,若单份血清标本不足,可采用两份结果相近、病史相同的标本混合,尽可能使50%实验标本分析物含量在参考区间外、可报告范围内,分析物含量分布越宽越好；临床难以在短时间内收集到可报告范围上、下限标本时可延长收集时间,尽量满足EP9-A2文件表1a、1b建议的各组分含量。每份标本在每个检测系统上重复测定2次,其顺序为1、2、3、4、5、6、7、8,8、7、6、5、4、3、2、1,标本浓度随机分布。同一项目在不同仪器上的测定时间间隔控制在30min内。

1.2.2 常规比对方案 在室内质控在控的前提下,收集10个样本,含正常和异常标本,分析物含量分布越宽越好,尽量收集当日最高和最低浓度的标本,比对标本与患者标本在同样条件下进行测定。每1～2周选择部分项目比对,每月保证每个项目比对一次,若某个检测系统进行大维修或更换对结果有影响的配件后,或同一项目两台仪器室内质控差异大于1/2CLIA′88则应按本法比对后方可进行常规标本检测。

1.3 临床可接受性能判断 将不大于CLIA′88允许误差或根据生物学变异确定的总误差的1/2作为两系统比较结果的临床可接受允许低限。

1.4 统计学处理

1.4.1 标准比对方案 以AU5400测定为比较方法（本室选用该机参加室间质评）,AU640测定为实验方法。所得数据首先进行方法内及方法间离群点判断,然后用EXCLE软件分析,并将美国Statland建议的医学决定水平浓度Xc代入回归方程,计算两系统之间的系统误差（SE）[4]。

1.4.2 常规比对方案 计算两系统间测定结果的百分偏差,要求80%以上标本的百分偏差小于1/4TEa。当每个项目数据大于40个以后,对两系统测定结果进行回归分析,计算线性回归方程：Y=bX+a。计算方法间的系统误差：将美国Statland建议的医学决定水平浓度Xc代入回归方程,计算两系统之间的系统误差（SE）。

表1 两仪器标准比对方案测定结果

表2 12次常规比对方案测定结果

1.5 不符合要求的项目处理 根据不符合要求的项目分析有无共通性,室内质控有无漂移或趋势性变化；排查样品处理是否合理；仪器状态是否正常；试剂是否变质等。及时对可能存在的问题进行纠正,纠正后重新检测标本,直至比对结果符合质量目标。

2 结果

2.1 标准比对方案 两检测系统测定结果的相关性分析及临床可接受性能结果见表1。各项目两检测系统间的决定分数均大于0.975,说明回归统计的斜率和截距可靠,可以用他们去估计不同检测系统间的系统误差,并以医学决定水平处的系统误差来判断不同检测系统间是否具有可比性。

2.2 常规比对方法 1年内12次两检测系统常规比对结果的相关性分析及临床可接受性能结果见表2。各项目两检测系统间的决定分数均大于0.975,说明回归统计的斜率和截距可靠,可以用他们去估计不同检测系统间的系统误差,并以医学决定水平处的系统误差来判断不同检测系统间是否具有可比性。

3 讨论

ISO15189要求当同一实验室用两套及以上检测系统检测同一项目时,需有比对数据证明其检测结果的一致性,本实验室有两台生化分析仪用于常规生化检测,为保证不同检测系统结果的一致性需要进行对不同仪器的结果进行比对。目前不同生化分析仪间结果比对多采用NCCLS的EP9-A2[5-9]文件进行,EP9-A2是系统偏倚分析的指导性文件,评价结果真实可靠,但参考该文件进行的比对方法是在实验室最佳条件下进行的方法学评价,本研究结果显示,因两台仪器都经过系统的保养并校准,所采用的试剂、校准品为同一厂家,且都采用新开瓶试剂,所以各项目方法内及方法间离群点少,相关性满足临床要求。

在日常工作中,仪器和试剂不可能永远处于最佳状态,如样品针或清洗机可能因受到标本轻微堵塞而造成检测系统性能受到影响,或在添加试剂过程中试剂受到污染或者在放置过程中变质甚至加错试剂,也可能造成检测系统性能受到影响,而常规的室内质控只有两个水平,并且多在检测前进行,难以保证上述可能影响检测系统性能的因素受到控制,由于按照EP9-A2进行的比对比较繁琐,不适宜频繁进行比对工作,目前已有关于血液分析仪、尿液分析仪用患者新鲜全血或尿液比对频率及方案的建立及应用[10-11],但生化检测系统的比对频率还未见报道,本研究探索在实施标准比对方案的同时增加常规比对方案,比对标本等同于患者标本在分析中单次测定,每次做相关分析并评估其相对偏差,要求80%标本不同系统间偏差不大于1/4TEa,否则应查找原因并采取纠正措施,重新比对直至两检测系统的结果具有可比性,每年对常规比对方案结果进行分析总结。该比对方案因比对频率高、标本量大、浓度水平分布广、允许偏差小,能更及时地发现检测系统性能的变化,从而更好地保证检测质量。在该方案的实施过程中,及时纠正了常规工作中仪器或试剂的非正常状况,因为人人参与该项工作,加强了工作人员的责任心,检验质量也得到提高。

综上所述,检测系统性能验证是前提,在保证检测系统精密度的前提下,定期参照 EP9-A2文件进行规范化的比对[12-14]是基础,在室内质控的监控下,增加常规比对能扩大监控范围,及时发现分析中的不稳定因素[15],建立起不同检测系统测定结果间的长效比对机制,能更好地控制实验室内结果的一致性。

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