茶树脱水素基因dhn2原核表达条件优化

房超，李叶云，常欣，丁菲，江昌俊

（安徽农业大学茶叶生物化学与生物技术教育部重点实验室，安徽合肥230036）

茶树脱水素基因dhn2原核表达条件优化

房超，李叶云，常欣，丁菲，江昌俊*

（安徽农业大学茶叶生物化学与生物技术教育部重点实验室，安徽合肥230036）

为了提高可溶性脱水素dhn2重组蛋白在大肠杆菌的表达量，研究了不同诱导条件对其表达的影响，包括诱导时间，诱导温度，IPTG浓度和初始诱导浓度。结果表明：重组表达载体pEASY-E1-dhn2在大肠杆菌中最佳诱导时间为4h，最佳诱导温度为30℃，最佳IPTG诱导浓度为0.8mmol/L，最佳诱导初始浓度为OD600=0.2。

茶树；脱水素；条件优化

脱水素最早发现于20世纪80年代，属于LEAD-Ⅱ家族，分子量从9到200kD不等[1]。脱水素富含甘氨酸和赖氨酸，具有很高的亲水性，能与膜脂结合阻止水分过多流失，以保护细胞免受干旱损伤[2-4]。另外，脱水素还具有蛋白保护能力，其K片段的双亲水α-螺旋结构可以稳定蛋白质结构，起到了类似于分子伴侣的作用[5]。柑橘[6]、桃树[7]和菠菜[8]等植物中发现脱水素能在低温下维持乳酸脱氢酶的活性。而茶树体内的脱水素蛋白的功能研究少见报道。

1 材料和方法

1.1.2 试剂胰蛋白胨，酵母浸出粉，氯霉素，氨苄青霉素购自索莱宝公司；异丙基-β-D-硫代半乳糖苷购自上海生工；分子质量蛋白Marker购自北京天根公司。

1.2.1 诱导时间优化

预培养菌液至OD600=0.5时，分装5mL菌液至灭菌的试管中，加入终浓度为0.1mmol/L的IPTG，37℃继续培养。在0h，2h，3h，4h，6h，8h时分别取菌液离心收集菌体，用bindingbuffer（50mmol/LPBSBuffer pH7.9，300mmol/LNacl，10mmol/L咪唑）悬浮菌体。冰水浴超声破碎（功率300W，破碎1s，间隙5s，每次循环数50，共5次）后，于4℃，8000r/min离心20min，保存上清。……