流式细胞术在首诊非霍奇金淋巴瘤骨髓侵犯中的作用＊

彭贤贵，孔佩艳，张 曦，刘 红，刘思恒，王 平，墙 星，邓小娟，张洪洋，陈幸华

（第三军医大学新桥医院血液科，重庆 400037）

本院血液病实验诊断中心采用骨髓穿刺（bone marrow as－pirate，BMA ）涂片和骨髓活检（bone marrow biopsy，BMB）联合流式细胞术（flow cytometry，FCM）首诊了17例骨髓淋巴瘤细胞侵犯 （NHL－BMI）或淋巴瘤细胞白血病（LMCL），现报道如下。

1 资料与方法

1.1 病例资料 17例首诊淋巴瘤的患者均为本科室2010年1月至2011年4月收治的住院患者，其中男11例，女6例；年龄12～77岁，平均51.0岁；就诊时病程1～6个月。首发症状及体征表现为头晕、乏力、心悸、面色苍白15例（88.2%），出血（四肢、躯干、齿龈、内脏）5例（29.4%），贫血11例（64.7%），发热11例（64.7%），肝脾大8例（47.1%），骨痛或胸骨压痛4例（23.5%）。6例（35.3%）患者浅表淋巴结轻度肿大，所有患者未能进行淋巴结病理检查。

1.2 方法

1.2.1 标本制备 无菌条件下行BMA和BMB。BMB取材标本长度为0.8～2.0cm，标本采集后立即在2mL的Bovine氏液中固定。BMA抽吸0.3mL骨髓液，制备7张涂片备用。另制备2张外周血涂片同时镜检。再抽吸骨髓细胞液1～2 mL，肝素抗凝，摇匀后置4℃保存，48h内进行FCM检测。

1.2.2 细胞形态学检查 细胞涂片经瑞氏－姬姆萨混合染液染色，在油镜（1000倍）下分类计数500个细胞。每个病例的骨髓涂片均做PAS和POX染色。骨髓涂片镜检有无淋巴瘤细胞，并观察细胞的异质性，包括大小、异形变、分化程度及有无成簇分布现象。

1.2.3 骨髓活检 标本经乙醇梯度脱水、塑料包埋后制备3张切片，行HGF及Gomori染色后封片镜检。骨髓切片镜检有无淋巴瘤细胞侵犯灶，并判断浸润类型。

1.2.4 多参数FCM检测 采用美国BD公司FACSCalibur型流式细胞仪及Cellquest软件进行荧光定量分析。每例标本分析10000个细胞，细胞在波长488nm处检测藻红蛋白（PE）的红色荧光和异硫氰酸荧光素（FITC）的绿色荧光，分别通过575nm和513nm滤光片收集，多甲藻叶绿素蛋白（Percp）的荧光通过635nm滤光片收集。……