参麦注射液对裸鼠皮下移植瘤抗血管生成作用的机理探讨

马亚军，钱晓萍，周荣平，张有成

(1南京市江宁医院，南京211100;2南京大学医学院附属鼓楼医院)

参麦注射液(SM)由人参、麦冬提取物混合组成，具有益气养阴的功效。研究表明［1］，SM在体外和荷瘤小鼠体内有明显的抗肿瘤血管生成作用。2005～2006年，我们制作了裸鼠荷人LOVO细胞大肠癌模型，旨在探讨SM对裸鼠人大肠癌移植瘤血管生长的抑制作用及机理。

1 材料与方法

1.1 材料及动物 SM为正大青春宝药业公司产品。人大肠癌LOVO细胞由南京市鼓楼医院细胞实验室培养。4～6周BALB/c-nu小鼠(SPF级)10只，均为雌性，重量16～18 g，购自上海斯莱克公司。血管内皮生长因子(VEGF)小鼠抗人一抗、CD34小鼠抗人一抗购自Neo Markers公司，凝血酶敏感蛋白1(TSP1)小鼠抗人一抗、抗小鼠二抗工作液购自Novocastra公司。

1.2 方法

1.2.1 裸鼠肿瘤模型制作 在37℃、5%CO2孵箱环境下，将人大肠癌LOVO细胞接种于含10%小牛血清的RPMI-1640培养基中，当肿瘤细胞处于对数生长期时，用生理盐水将其制成浓度1×107个/ml的细胞悬液，取0.2 ml接种于裸鼠腋窝皮下。成功建立裸鼠肿瘤模型后，将小鼠随机分为两组各5只，对照组腹腔注射生理盐水0.4 ml/d，SM组腹腔注射SM 20 ml/(kg·d)，均连续2周。

1.2.2 VEGF、TSP1检测 2周时，采用脱颈椎法处死两组小鼠，完整剥取肿瘤。用10%甲醛固定24 h，对肿瘤组织进行脱水、透明、石蜡包埋，5 μm连续切片，行常规HE染色。采用免疫组化染色法检测微肿瘤血管密度(MVD)、VEGF及TSP1。PBS替代一抗作为阴性对照。

1.2.3 评定标准 ①肿瘤质量抑制率:从给药第1天起，每2 d测量肿瘤长径、短径，计算肿瘤体积。停药后处死小鼠，剥取瘤块，称取肿瘤质量，计算肿瘤质量抑制率。②MVD:采用Weidner判断标准。……