HPLC法测定硫酸氢氯吡格雷片的含量

郑子栋

(河南省食品药品检验所，河南 郑州 450003)

硫酸氢氯吡格雷为血小板聚集抑制剂，用于预防动脉粥样硬化血栓的形成，由法国Sanofi－Aventis原研，1998年美国上市，2001年在我国批准上市，商品名波立维(Plavix)。根据文献资料［1，2］，本文采用高效液相色谱法，以手性色谱柱，建立了硫酸氢氯吡格雷片中硫酸氢氯吡格雷的含量测定方法，方法简便，准确。

1 仪器与试药

1.1 仪器 Waters 2695高效液相色谱仪带二极管阵列检测器，ULTRON ES－OVM 手性色谱柱(15 cm ×4mm，5μm)，ELGA Classic超纯水器，Sartorius ME235S分析天平。

1.2 试药及试剂 硫酸氢氯吡格雷对照品(中国药品生物制品检定所)，硫酸氢氯吡格雷片由河南XSK制药公司提供，批号:010826，010917，010921;乙腈为色谱纯，乙酸铵为优级纯。

2 色谱条件

ULTRON ES－OVM 手性色谱柱 (15 cm ×4mm，5μm)，以 0.03 mol·L－1的乙酸铵溶液－乙腈(78∶22)为流动相，流速:0.8mL·min－1，柱温:30 ℃，进样量:10μL，检测波长为230 nm。在上述色谱条件下，硫酸氢氯吡格雷的主峰保留时间约为 11.5min(见图1)。

3 方法与结果

图1 硫酸氨氯吡格雷的色谱图

3.1 系统适用性试验 取硫酸氢氯吡格雷溶液适量，置10mL量瓶中，制成每mL约含0.1mg的溶液，水浴加热4 h，高温破坏后，照上述色谱条件，进样10μL，结果见图2，主峰和降解杂质峰分离较好。

图2 硫酸氢氯吡格雷的高温破坏降解产物色谱图

3.2 线性关系测定 精密称取硫酸氢氯吡格雷对照品适量，置100mL量瓶中，用流动相溶解并稀释制成每mL约含1mg的溶液，作为对照品贮备液，精密量取上述贮备液2.0mL、3.0mL、4.0mL、5.0mL、6.0mL、7.0mL，分别置 50mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得 40.8、61.3、81.7、102.1、122.5、142.9 μg·mL－1的对照品溶液，精密量取 10μL进样，记录色谱图。以峰面积(A)与溶液浓度(C)进行线性回归，线性方程为:A=4.6152 ×10－8C －0.00066，r=0.9998。结果表明，硫酸氢氯吡格雷在 40.8 ～142.9 μg·mL－1浓度范围内，与峰面积呈良好线性关系。

3.3 精密度试验 取线性关系测定项下的溶液，重复进样5次，结果峰面积的RSD为0.83%(n=5)，精密度良好。

3.4 溶液的稳定性 取线性关系测定项下的溶液，分别于0、1、3、6、9、12 h 进样 10μL，记录色谱图。结果峰面积的RSD为1.1%(n=6)，溶液在12 h内稳定性良好。

3.5 回收率试验 分别精密称取硫酸氢氯吡格雷对照品约75mg、100mg、125mg(各3 份)，分别置100mL 量瓶中，按处方比例加入微晶纤维素、羟丙纤维素及硬脂酸镁等辅料，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，过滤，精密量取续滤液10μL照上述色谱条件进样测定，记录色谱图。另取硫酸氢氯吡格雷对照品适量，加流动相溶解并稀释制成每mL约含100 μg的溶液，同法测定，按外标法以峰面积计算即得。测得平均回收率97.5%，RSD为1.6%(n=9)。

3.6 样品的测定 取本品20片，精密称定，研细，精密称取适量(约相当于硫酸氢氯吡格雷100mg)，置100mL量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液，照回收率测定项下的方法分别测定，结果见表1。

表1 硫酸氢氯吡格雷含量测定结果(n=3)

4 讨论

4.1 本文采用手性色谱柱，能使主成分与杂质有效分离，结果准确可靠，满足测定要求。

4.2 硫酸氢氯吡格雷原料晶型有Ⅰ型与Ⅱ型，Ⅱ型申请专利保护，本试验所用硫酸氢氯吡格雷片的原料药为晶型Ⅰ。