花色素苷诱导小鼠巨噬细胞一氧化氮生成及其机制

金丽琴，陈秀芳，吕建新，刘明达，陈柏坤，钱 松

(温州医学院 1.基础医学院生物化学教研室，2.生命科学学院，3.附属第一人民医院 第八院区，4.药学院，浙江 温州 325035)

花色素苷是一类溶于水，无毒性，广泛分布于植物界的多酚类黄酮化合物。有研究表明，花色素苷具有抗氧化[1-3]、抗炎、抗肿瘤[4-5]等活性，而有关其免疫调节活性的研究报道较少。本实验从黑米中提取花色素苷，以矢车菊素-3-葡萄糖苷单体(cyanidin 3-glucoside，C3G)为阳性对照，观察其诱导小鼠腹腔巨噬细胞NO生成的作用，旨在探讨花色素苷的免疫调节活性及其作用机制。

1 材料

黑米，市售;C3G、脂多糖(LPS)、RPMI 1640培养基，Sigma公司;胎牛血清，杭州四季青生物材料有限公司;红细胞裂解液、CCK-8试剂、NO、一氧化氮合酶(NOS)检测试剂盒，江苏碧云天生物公司;Trizol reagent RNA提取试剂盒，Invitrogen公司;RTPCR试剂盒，宝生物(大连)有限公司;iNOS、β-actin引物序列由上海生物工程技术服务有限公司合成。

健康ICR小鼠，雌性，体重20～25 g，由温州医学院实验动物中心提供，温医动字2005-0061。

2 方法

2.1 黑米花色素苷的制备

选取外被色深黑粳米，纤维素酶酶解黑米米粒的表层，用90%乙醇浸提并终止酶解反应，去除醇溶性杂质，0.1 mol/L HCl溶液-55% 乙醇(15∶85)浸提液浸提，重复2次，减压蒸馏，Amberlite XAD-7大孔吸附树脂吸附，80%乙醇洗脱，真空抽滤去杂;减压浓缩，经冷冻干燥得粉末状黑米花色素苷(black rice anthocyanin，BA)[6-7]。高效液相色谱法分析测得花色素苷纯度为37.69%。

2.2 小鼠脾细胞增殖实验

小鼠断颈处死后，无菌操作取出脾脏，剔除系膜并将其剪碎后，置于筛网中研磨制备单个脾细胞悬液。用红细胞裂解液溶解红细胞后，用RPMI 1640培养液清洗2次，然后悬浮于含10%胎牛血清的RPMI 1640培养液中。……