HPLC法快速测定肺癌患者血浆中依托泊苷的浓度及其治疗窗考察

刘治安，彭玉龙，许斌，莫炫永，蔡宇（.广东东莞市东华医院，东莞市 50；.广东东莞市国药质量检测中心，东莞市 500；.暨南大学，广州市 506）

临床上肺癌是最常见的恶性肿瘤，其化疗方案中常用抗肿瘤药是依托泊苷（Etoposide，VP-16）[1]。VP-16是天然产物鬼臼脂的半合成衍生物，在体内代谢由细胞色素P450（CYP）3A酶催化，VP-16的疗效和毒性与血药浓度、体内药物代谢酶的活性有较强的相关性[2]。为使VP-16能安全、有效地用于肺癌患者，笔者采用高效液相色谱（HPLC）法测定其在肺癌患者中的血药浓度，并结合临床疗效和不良反应的观察结果，建立肺癌患者VP-16最佳血药浓度范围。

1 材料

1.1 仪器

1200RRLC高分离度快速液相色谱仪，包括G1314B VWD SL紫外检测器、G1312B Bin Pump SL二元泵、G1316B TCC SL柱温箱、G1329B ALS SL标准自动进样器（美国Agilent公司）；TDL-5-A低速台式离心机（上海安亭科学仪器厂）；KQ5200超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。

1.2 试药

VP-16对照品（中国药品生物制品检定所，批号:100388-200401）；甲醇为色谱纯，水为蒸馏水（经0.2 μm微孔滤膜过滤）；空白人血浆为广东东莞市东华医院检验科提供的健康体检者血浆。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱:Waters Symmetry®C18（150mm×4.6mm，5 μm）；流动相:甲醇-水（45∶55，流动相在使用前需经0.2 μm微孔滤膜过滤）；流速:1mL·min－1；检测波长:220 nm；进样量:20μL；柱温:30℃。

2.2 血浆样品的处理

患者用药后45min时采血5～6mL，常温静置2 h，取血浆3mL离心（4000 r·min－1）10min，精密量取血清1.00mL，再精密加入甲醇至2.00mL，涡旋混匀1min，静置10min，再离心（4000 r·min－1）10min，取上清液用0.2 µm微孔滤膜过滤，取续滤液即得。进样20μL测定，记录色谱图（分析时间为12min），VP-16的保留时间约为7.52min。高效液相色谱图见图1。

2.3 检出限及定量限的测试

开启HPLC仪，运行约3 h至仪器基线平直后，量取基线噪声（N），按3倍N的电平值（mV）确定最小检出峰面积。……