马传染性贫血病毒弱毒疫苗S2基因在体内变异分析

王 帅，王雪峰，林跃智，姜成刚，吕晓玲，赵立平，周建华*，曲娟娟

(1.东北农业大学资源与环境学院，黑龙江 哈尔滨 150030；2.中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物病研究室，黑龙江 哈尔滨 150001)

马传染性贫血病毒(Equine infectious anemia virus，EIAV)可以导致马属动物患马传染性贫血(EIA)，主要表现为持续感染、反复发热和贫血等症状[1]。EIAV基因组全长约8.2 kb，除编码3个主要结构蛋白外，还编码3个非结构蛋白Tat、S2和Rev蛋白。其中，S2蛋白的作用机制尚不明确。但研究表明，S2基因在EIAV感染马体内高度保守；缺失S2基因将导致病毒毒力减弱，并使其在体内复制能力明显降低[2]。而在体外试验中，S2基因的缺失并不影响病毒在培养细胞中的复制[3]。

EIAV驴白细胞弱毒疫苗EIAVDLV121是将致病性强毒株在体外驴白细胞中传代弱化后获得的，该疫苗具有良好的安全性和诱导免疫保护效果[4]。我们的研究表明，EIAVDLV121的S2基因与其亲本强毒株存在明显差异，两者核苷酸和氨基酸序列差异率分别为4.1%和10.4%[5]。由此推测，EIAVDLV121的致弱与S2基因在体外传代过程中的变异有关，而关于EIAVDLV121S2基因在接种马体内的变异情况尚无报道。本实验以EIAVDLV121接种实验马匹，定期检测EIA体征，采取样品，测定并分析EIAVS2基因的序列，以研究EIAVDLV121S2基因在体内的变异规律。

1 材料和方法

1.1 EIAV疫苗株与实验动物 驴白细胞弱毒疫苗株EIAVDLV121由哈尔滨兽医研究所大动物研究室慢病毒课题组提供；实验马购自黑龙江省某马场，经两次免疫琼脂扩散法检测EIAV抗体为阴性。

1.2 主要试剂 QIAamp Viral RNA Mini试剂盒购自QIAGEN公司；……