断奶仔猪对毒力基因缺失大肠杆菌的免疫应答

胡文霞，冯瑜菲，何丽丽，关玮琨，江馗语，师东方

(东北农业大学动物医学学院，黑龙江 哈尔滨 150030)

猪水肿病(Eedema disease of swine，ED)是由某些特定血清型产志贺样毒素大肠杆菌(STEC)引起的断奶仔猪的一种急性致死性传染病[1]，以眼睑、胃壁等处水肿、共济失调、惊厥和麻痹为特征[2]。研究表明，F18ab菌毛和志贺样毒素Ⅱ型变异体(Shigalike toxinⅡ variant，SLT-Ⅱe)是猪 ED大肠杆菌主要毒力因子[3]，致病菌以其菌毛粘附于猪小肠上皮细胞，在肠道内定居和增殖并产生SLT-Ⅱe侵入机体，导致感染猪出现水肿和神经症状[4]。

目前，应用灭活疫苗对仔猪进行免疫是预防该病的主要措施，但免疫效果并不理想，这可能与灭活疫苗在制备过程中造成抗原破坏或有效抗原量不足有关，而且不能发挥肠道黏膜免疫系统在抗感染过程中的免疫保护作用[5]。杨春柳等用SLT-Ⅱe编码基因突变菌株(O139/SLT-Ⅱe*/07)口服免疫小鼠，证实该基因突变菌株对小鼠安全，能诱导小鼠产生局部免疫、细胞免疫和体液免疫应答，显示出了该菌株作为口服疫苗的潜在价值[6]。本实验用该突变菌免疫断奶仔猪，为猪水肿病口服疫苗的研究提供更加直接的实验数据。

1 材料和方法

1.1 菌株、主要试剂及实验动物 猪ED大肠杆菌(C83684，O139；CMCC44498，O138)购自中国兽医药品监察所；猪ED大肠杆菌基因突变菌株(O139/SLT-Ⅱe*/07)由本实验室构建[7]；断奶仔猪购自哈尔滨郊区某猪场；HRP标记的兔抗猪IgG购自北京博奥森生物技术有限公司；Affinity Purified Coat anti-Pig IgA购自哈尔滨欧瑞德生物试剂公司；CaCl2和海藻酸钠购自国药集团；LB培养基购自全氏金生物有限公司；猪细胞因子IL-10、IL-4、INF-γ的ELISA检测试剂盒购自天根生化科技有限公司。……