蓝舌病病毒17型VP2蛋白单克隆抗体的制备及其抗原表位的鉴定

王凌凤，杨 涛，孙恩成，耿宏伟，秦永丽，赵 晶，蔡绪禹，刘霓红，李文京，吴东来*

(1.中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部兽医公共卫生重点开放实验室，黑龙江 哈尔滨 150001；2.中国动物疫病预防控制中心，北京 100125)

蓝舌病(Bluetongue，BT)是一种由蓝舌病病毒(Bluetongue virus，BTV)引起的通过库蠓等昆虫传播的非接触性病毒性动物传染病，以发热、白细胞减少、颊粘膜和胃肠道粘膜严重卡他性炎症为主要特征。主要感染反刍类动物，动物感染BTV的平均死亡率为30%，绵羊可高达80%[1]。BT广泛流行于热带、亚热带及温带国家，给家畜饲养业带来严重经济损失。世界动物卫生组织(OIE)将其列为必须呈报性疾病，我国将其列为一类动物疫病。

BTV基因组由10个双链RNA节段组成，包裹于双层衣壳内。内层衣壳由L3和S7基因编码的VP3和VP7组成，VP3和VP7为病毒的群特异性抗原；外层衣壳由L2和M5基因编码的VP2和VP5组成，VP2和VP5属于BTV的型特异性抗原[2]。其中，VP2存在许多能够诱导产生中和抗体的抗原表位[3]，对BTV的型特异性起决定作用，根据中和试验可以将BTV划分为24个血清型。本实验应用原核表达的两段重组BTV17 VP2蛋白制备了型特异性单克隆抗体(MAb)，并对其抗原表位进行了鉴定，为BTV17型特异性检测方法的建立和VP2蛋白功能的研究奠定了基础。

1 材料和方法

1.1 主要实验材料 原核表达载体pET-30a、E.coli DH5感受态细胞、E.coliBL21感受态细胞、SP2/0细胞、BHK-21细胞、pFast-VP2重组质粒、抗BTV17型绵羊阳性血清、BTV株(1、2、3、5、8、10、11、16、17、23、24 血清型)、茨城病病毒(IBAV)均由本研究室保存；MA-104细胞、牛轮状病毒(BRV)、牛呼肠孤病毒(RV)由中国农业科学院哈尔滨兽医研究所于力研究员提供；……