副猪嗜血杆菌野外分离株的ERIC-PCR及其外膜蛋白图谱分析

彭 凌，朱必凤，杨旭夫，刘博婷，韦昭玉

(韶关学院英东生命科学学院，广东 韶关 512005)

副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis，HPS)能够导致病猪发生以纤维素性多发性浆膜炎、心包炎、关节炎为特征的综合征，又称为革拉瑟氏病(Glasser's disease)。该病于1910年由Glasser首次报道。目前，国际上将HPS菌株分为15个血清型。研究表明，不同血清型菌株之间的交叉免疫保护力不强，或者无交叉保护作用，而且约15%～41%的分离株不能够以现有的血清分型方法进行鉴定，给免疫防治造成很大困难[1-3]。

对于HPS的研究除血清分型外还常采用酶切指纹图谱(REF)、多位点酶电泳分析(MLEE)和肠杆菌科基因间重复一致序列PCR(Enterobacterial repetitive intergenic consensus-PCR，ERIC-PCR)等方法进行HPS基因的分型。但前两种方法耗时、操作复杂，并且成本高。2000年Rafiee等将ERIC-PCR用于HPS分型中，显示不同血清型的标准菌株具有不同的指纹图谱，具有良好的多态性，该技术可以用于该菌感染的流行病学研究，有利于鉴定主要流行菌株及其进化关系[4]。

外膜蛋白(OMP)是革兰氏阴性细菌的表型标志，菌株不同，则OMP型不同；在血清学分型复杂的情况下，OMP是用于追踪流行株的工具[5]。OMP分型仅涉及OMP的提取和SDS-PAGE分析，具有快速、低消耗的特点，如果把OMP分析应用于HPS的分型可以在一定程度上辅助ERIC-PCR分型的准确性。

本实验在对HPS分离鉴定的基础上，对不能定型的野外分离株采用ERIC-PCR分型和OMP分型技术研究不同猪场的HPS流行复杂程度及差异，并应用于HPS感染的流行病学调查。

1 材料和方法

1.1 菌株24个HPS分离株为本实验室按照文献[6]方法由3个发病猪场发病猪的上呼吸道或病变组织中分离并鉴定，分别为江西(J猪场)J1～J88个分离株；……