H9亚型禽流感病毒血凝素特异性单因子血清制备

陈晓妹，王 飞，张 翼，刘丽玲，田国斌，曾显营，管雪婷，程 成，陈化兰，李雁冰

(中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点实验室/兽医生物技术国家重点实验室，黑龙江 哈尔滨 150001)

禽流感(Avian influenza，AI)是由正粘病毒科A型流感病毒引起的一种禽类(家禽和野禽)的感染和/或疾病综合征[1]，AI病毒(AIV)亚型众多，其中H9N2亚型AIV在我国家禽中广泛存在[2]，虽然该亚型病毒致病力低，但临床上常与大肠杆菌和支原体等混合感染，影响家禽的产蛋率，同时给养禽业造成一定的经济损失。相关文献显示H9N2亚型AIV能够感染人类，使得H9N2亚型AIV具有比较重要的公共卫生学意义[3-6]。

诊断和疫苗接种是AI防制的关键[7]。血凝-血凝抑制(HA-HI)试验是AI诊断的常用方法，也是病毒抗原性差异分析的常用方法[8]，而病毒抗原性差异分析是筛选疫苗株的常用方法。特异性血清是HA-HI试验的必备条件。本实验从1996年～2008年我国流行的不同亚群的H9N2亚型AIV中筛选6株代表病毒株，将其血凝素(HA)基因经密码子优化后，分别克隆到pCAGGS载体中[9-10]，以重组质粒免疫SPF鸡，制备特异性的抗血清，为临床诊断和病毒抗原性差异分析提供特异性H9亚型AIV HA单因子血清。

1 材料和方法

1.1 病毒株、质粒和血清 6株代表病毒株分别为：CK/HuN/33/08(HuN33/08)、CK/HuNHS/1/06(HuNHS1/06)、DK/GX/10/05(GX10/05)、SH10/01(DQ064378.1)、HLJ135/00(DQ064366.1)和 SD6/96(DQ064376.1)，HA序列由中国农业科学院哈尔滨兽医研究所国家禽流感参考实验室测序保存；将H9亚型AIV的HA基因用鸡偏嗜的密码子进行优化，优化的序列由南京金斯特公司人工合成；真核表达质粒pCAGGS由农业部动物流感重点开放实验室保存；……