奶牛乳房炎乳中结合珠蛋白含量的夹心ELISA检测方法研究

杨 宇，吕 英，石 晶，李庆章

(东北农业大学乳品科学教育部重点实验室，黑龙江 哈尔滨 150030)

乳房炎对奶牛的健康和产奶量有一定的影响，因此建立一种简单、准确、快速、有效的乳房炎诊断方法是十分必要的。奶牛乳房炎与细菌感染密切相关，奶牛受感染乳区在炎症期间能够产生急性期蛋白[1-3]。结合珠蛋白(Haptoglobin，Hp)是一种奶牛乳房炎期间重要的急性期蛋白，其血液和乳汁中含量变化与乳房炎患病情况密切相关。Hp作为新发现的乳房炎诊断敏感性指标，在乳房炎的诊断中具有一定的应用价值和应用前景[4-6]。目前对乳房炎的诊断一般采用物理和化学的方法，乳房炎期间乳清中Hp含量检测方法国内尚未报道。

Hp是一种能够和血红蛋白(Hemoglobin，Hb)特异性结合形成稳定化合物的糖基化蛋白[7]。研究表明，牛奶中Hp仅来源于肝细胞Hp产物，但是近期研究表明，Hp mRNA也可以在乳腺中翻译，并且Hp可在乳腺中表达[8]。因此可以利用检测牛奶中Hp含量确定奶牛患乳房炎的情况。本研究基于商品化抗体，利用血红蛋白与结合珠蛋白特异性结合的原理，建立夹心ELISA检测Hp含量方法，从而为Hp夹心ELISA检测试剂盒的提供试验方法。

1 材料和方法

1.1 样品采集及制备 选取黑龙江省哈尔滨市周边奶牛场处于相同生理水平(年龄、泌乳期和产奶量)的荷斯坦奶牛，无菌采集牛奶样品，每头奶牛采集牛奶样品100 mL，50 mL用于体细胞数，50 mL保存于4℃，12000 r/min离心30 min，乳清-20℃保存备用。

所有牛奶样品应用体细胞计数法(SCC)计数。按照文献[9-11]的判定标准判定样品：SCC<200×103cells/mL样本定为健康样本；200×103cells/mL1000×103cells/mL为乳房炎临床样本。……