PRRSV GP5蛋白抗独特型单链抗体的构建表达及鉴定

于 颖，王 刚，宋腾飞，孔 宁，马晓春，姚永红，肖一红*，周恩民,2*

(1.山东农业大学动物医学院，山东 泰安 271018；2.西北农林科技大学动物医学院，陕西 杨凌 712100)

猪呼吸与繁殖障碍综合征病毒(Porcine reproducitive and respiratory syndrome virus，PRRSV)为有囊膜的单股正链RNA病毒，属于动脉炎病毒科(Arteriviridae)动脉炎病毒属(Arterivirus)，含有6个结构蛋白。其中表面蛋白(GP5)和基质蛋白(Matrix)可能是诱导中和抗体的主要病毒抗原[1]。

独特型(Idiotype，Id)是存在于抗体和T，B淋巴细胞表面受体可变区(V)内的抗原决定簇。Jerne提出的免疫网络学说认为，机体内通过一系列Id和其抗独特型(Anti-Id或Ab-2)的正反馈或负反馈来调节机体对某一抗原的免疫反应[2]。感染了PRRSV的猪血清中有两种不同的抗GP5的自身抗独特型抗体(auto-Ab2)，在针对PRRSV感染的免疫网络中起到正向或负向调控作用[3-4]。本实验室前期采用顺序免疫法制备的针对PRRSV GP5抗原的MAb2-5G2可以特异性结合PAM和MA-104细胞[5]。MAb2-5G2通过正反馈调控机体对抗PRRSV感染的细胞和体液免疫反应，提高感染高致病性PRRSV的断奶仔猪成活率达50%以上。本研究构建表达了MAb2-5G2的scFv，并证明该scFv可以被兔抗MAb2-5G2抗体，即Ab3识别，复性后的scFv蛋白能够特异性结合Marc-145细胞。为进一步深入研究其所识别的细胞蛋白与PRRSV感染细胞的关系及在猪体内调控免疫系统抵抗PRRSV的感染提供了条件。

1 材料和方法

1.1 材料及试剂 鼠源杂交瘤细胞MAb2-5G2由本实验室制备；E.coliTop10、BL21 Rosetta菌株由本室保存；pEasy-E1载体、DNA Marker、TransTaq HiFi DNA聚合酶和鼠源抗His单克隆抗体(MAb)购自北京全式金公司；TRIzol试剂和M-MLV反转录酶购自TaKaRa公司；DMEM基础培养基、胎牛血清购自Invitrogen；CNBr活化的琼脂糖凝胶6MB购自GE公司；HRP标记的羊抗鼠二抗和羊抗兔二抗均购自北京康地恩公司。……