苦碟子对人脐静脉血管内皮细胞株HUVEC 生长的影响*

彭乙华，曾恒礼，蒋 红，蔡 燕，4，陈 敏，陈玉华，康后生，严宗逊

(1.川北医学院附属医院内分泌科，四川 南充 637000;2.富顺县第三人民医院急诊科，四川 自贡 6432013;3.川北医学院附属医院风湿免疫研究所，四川 南充 637000;4.川北医学院附属医院检验科，四川 南充 637000)

糖尿病周围神经病变［1］(diabetic peripheral neuropathy，DPN)是糖尿病患者致残的重要原因，严重影响人类健康。故加强对糖尿病周围神经病变的治疗具有重要意义。中医中药治疗糖尿病周围神经病变历史悠久，取得了一定的疗效［2，3］，其中苦碟子注射液凭借其疗效好、毒副作用低尤其受到临床医生的青睐，已广泛用于治疗糖尿病周围神经病变，但其具体机制尚不明确，故本实验以不同浓度的苦碟子注射液处理人脐静脉血管内皮细胞株HUVEC，探讨苦碟子治疗DPN 的可能机制。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

1.1.1 细胞:人脐静脉血管内皮细胞株HUVEC 由本院风湿免疫研究所保存。

1.1.2 试剂:RPMI1640 培养基(购自美国GIBCO);胎牛血清(购自杭州四季青公司)，使用浓度10%;MTT(购自美国sigma)，用0.1mol/L、pH 值为7.2 的磷酸盐缓冲液配制为5mg/ml 于－20℃保存备用;DMSO 即二甲基亚砜(购自美国sigma);苦碟子注射液由本院药房提供(10ml/支，通化华夏药业有限责任公司生产，国药准字Z20025450))，4℃保存备用，使用时以培养基稀释。

1.1.3 仪器:酶标仪(美国BD-RAD model 680 型)。

1.2 方 法

1.2.1 细胞培养:人脐静脉血管内皮细胞株HUVEC 细胞用RPMI1640 培养基(加有10%的胎牛血清和终浓度皆为100U/ml 的青霉素及链霉素)于37℃、5%CO2条件下培养，待细胞密度为90%左右时用0.25%胰酶消化细胞，按每孔1000 个细胞左右(每孔终体积200μl)传代至96 孔微量反应板中继续培养24 小时后进行后续实验。……