谷胱甘肽拮抗锰致雄性大鼠生殖损伤的研究

王乾兴 金 华 张先平

1.贵州省遵义医学院细胞生物学与遗传学教研室(563003);2.贵州省习水县人民医院急诊科;3.贵州省遵义医学院组织胚胎学教研室

过量锰可导致人和动物睾丸生长发育与成熟的延迟、精液浓度和活性精子率降低，最终引起生精功能障碍等一系列生殖毒性［1～4］。本研究小组前期发现过量锰诱导的生精细胞凋亡与细胞内氧化应激有关［5］。谷胱甘肽(GSH)是细胞内重要的抗氧化剂，在抗氧化损伤中具有重要作用。为此，本实验采用锰对SD大鼠进行急性和亚急性染毒，然后投放GSH以观察其对锰染毒诱发的生精细胞凋亡及睾丸脂质过氧化产物——丙二醛(MDA)、抗氧化酶——谷胱甘肽过氧化物酶(GSH－Px)的影响，以探讨GSH对锰致雄性大鼠生殖损害的拮抗机理，为锰中毒的预防和治疗提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 实验动物及分组

由第三军医大学动物中心提供的清洁级健康雄性SD大鼠48只［合格证号:SCXK(渝)20020003］，体重150～180g，随机平均分为对照组、染锰组和GSH拮抗组。

1.2 主要试剂

MnCl2·4H2O(分析纯)购于中国医药集团上海化学试剂公司;GSH(分析纯)购于美国Sigma公司;TUNEL试剂盒购于德国Boechringer Mannheim公司;MDA和GSH－Px检测试剂盒购于南京建成生物工程研究所。

1.3 模型建立与标本制备

染锰组和GSH拮抗组大鼠各分成两批，30mg/kg MnCl2·4H2O染锰1周(急性染毒)和4周(亚急性染毒)，再分别给予生理盐水(染锰组)和1mmol/kg GSH(GSH拮抗组)2周［6］，对照组给予生理盐水。以上各组动物的给药途径均为腹腔注射，1次/d，每周5d。停药后继续观察2周，分批处死动物，每组各8只，取双侧睾丸分别进行冷冻切片和制备组织匀浆。……