FISH技术在诊断唐氏综合征及植入前遗传学诊断中的临床应用

万均辉 钟泽艳 田佩玲 韦相才，* 张清健 李铭臻

1.南方医科大学医学遗传教研室(广州，510080);2.广东省计划生育科学技术研究所

唐氏综合征又称21－三体综合征或先天愚型，是由于生殖细胞在减数分裂过程中染色体未分离所致。目前，对于此病尚无有效的治疗手段。因此，在孕期及早、准确地做出诊断，防止患儿出生是降低患病率的重要措施。近年来，建立快速有效、简便准确、易于推广的唐氏综合征产前诊断方法是研究的热点之一［1］。传统细胞遗传学方法又称染色体核型分析是目前公认的诊断染色体异常的金标准，但受细胞培养成功率与核型质量不甚稳定的影响，该技术的普及受到一定限制。本研究探讨在染色体核型分析基础上，建立优化荧光原位杂交技术(FISH)，用于产前唐氏综合征诊断和单细胞植入前遗传学诊断(PGD)。

1 材料与方法

1.1 研究对象

外周抗凝静脉血采集于广州智灵学校;羊水标本由中山大学达安基因诊断中心提供。未受精卵、卵裂球来自本所生殖中心实验室。

1.2 主要仪器和试剂

主要仪器有荧光显微镜。主要试剂采用荷兰Kreatech混合探针，由广东友宁贸易有限公司提供(双色，X，21)。2l号和X染色体检测探针为位点特异性探针，分别用红色和绿色标记。其他试剂:①20×SSC:氯化钠175g，柠檬酸三钠88.2g，加三蒸水到1 000ml。②变性液:甲酰胺 28ml，20 × SSC 4ml，蒸馏水8ml，终体积40ml，充分混匀，调整pH至7.0～8.0，密封保存于4～8℃，每次使用前均需测定pH值。③洗脱液:甲酰胺20ml，20×SSC 4ml，蒸馏水16ml，终体积 40ml。④SSCT:20 × SSC 100ml，Tween－20 0.2ml，加双蒸水至终体积为 1 000ml。

1.3 标本收集

1.3.1 外周静脉血 外周血直接涂片，封片，备用;外周血淋巴细胞和羊水细胞培养及核型分析，按标准方法进行。……