潮阳草鸡胚胎成纤维细胞的体外培养

丁 鸿，邱东萍，游柏寿

（1.揭阳职业技术学院，广东 揭阳 522000；2.彭泽县人民医院，江西 彭泽 332700）

潮阳草鸡是潮汕地区的一种优良鸡种，善觅食，抗病力强，成活率高。属瘦肉型，皮薄肉嫩，味道鲜美，香脆滑润，适宜白切、清炖、盐焗等，是传统的宴客佳肴。本实验以潮阳草鸡胚胎组织为材料，进行体外成纤维细胞的培养，旨在为潮阳草鸡的育种提供细胞学方面的依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 供试材料 潮阳草鸡孵化蛋30枚，9～13日龄，购自汕头市白沙禽畜原种研究所种鸡场。

1.1.2 供试试剂 MEM(含Earle′s盐)培养基购自Gibco，胰蛋白酶（Trypsin 1：250）购自 Amresco，标准胎牛血清（Standard FBS）购自Hyclone，台盼蓝购自Sigma，青霉素、链霉素为国产。全培养基：MEM基础培养基+10%标准胎牛血清+100 IU/mL双抗。

1.2 方 法[1-3]

1.2.1 原代培养 超净工作台内取鸡胚腿部肌肉组织置于小培养皿内，用1×PBS+1%双抗漂洗4～5次，用眼科剪剪成1mm3左右大小，移入培养瓶壁，均匀分散，加入全培养液，倒置培养瓶，置CO2培养箱中（37.5℃，5%CO2），过夜。当组织块贴壁牢固时，翻转培养瓶，不浸润组织块。当细胞长出后，及时更换培养液继续培养。

1.2.2 传代培养 当培养细胞生长至80%～90%汇合时，可进行传代培养。去旧培养液，加入预热至37℃，0.75%的 NaCl溶液，清洗细胞 2～3次，然后加入0.25%的胰酶液，消化10～30 s，倒置显微镜下观察。当发现细胞胞质回缩，细胞间隙增大时，立即加入全培养液，细胞悬液计数，按1∶2或1∶3的比例分瓶，放入温箱中继续培养。

1.2.3 细胞冷冻保存 将处于生长对数期的细胞于24 h前更换新鲜全培养基。常规方法消化细胞，制备成单细胞悬液，血球计数板计数。1 000 r/min离心8min，收集细胞。……