一株新城疫病毒的分离鉴定

文│邹立宏 [瑞普（保定）生物药业有限公司]

翟含流（河北省保定市北市区动物卫生监督）

新城疫（Newcastle disease， ND）是由新城疫病毒（NDV）引起的一种侵害禽类的急性、高度接触性传染病。2011年6月，某肉鸡养殖场爆发了疑似新城疫的病情，鸡群34日龄发病，表现为精神沉郁、食欲不振，采食量下降50%、并伴有严重的呼吸道症状，拉绿色粪便。发病率20%左右，死亡率14%左右。剖检发现气管环出血、肌胃底部、腺胃潮红，十二指肠、卵黄蒂附近有枣核状溃疡和出血，盲肠扁桃体出血，直肠条状出血，肾脏肿胀。为了对该病作出准确诊断并制定出有效的防控措施，采集病鸡气管、肾脏、脑等组织，进行病原的分离与鉴定。

一、材料与方法

1.材料。

（1）SPF鸡胚及SPF鸡。9～11日龄SPF鸡胚和SPF鸡均购自北京梅里亚-维通实验动物技术有限公司。

（2）标准阳性血清。ND标准阳性血清、禽流感（A1）H9、H5标准阳性血清，均购自中国农科院哈尔滨兽医研究所。

2.方法。

（1）病毒分离。无菌采集病死鸡气管、肾脏、脑，放入研钵中剪成小块，加入灭菌的PBS冲洗，洗去红细胞，反复2～3次。然后将病料加入研磨器中磨碎，加少量灭菌PBS液稀释，反复冻融3次后，5000转/分钟离心10分钟，取上清，用0.22微米的滤膜滤过除菌，将滤液接种10日龄SPF鸡胚，37℃培养，无菌收集尿囊液（弃去24小时死亡鸡胚），-20℃保存。

（2）血凝性检测。收获鸡胚尿囊液，进行血凝（HA）试验。

（3）血凝抑制试验。按常规将具有血凝性的病毒，分别与新城疫、禽流感（H9或H5）阳性血清进行交叉HI试验。

（4）病毒毒力的测定。按常规方法，分别测定鸡胚半数致死量（ELD50）、最小致死量致死鸡胚的平均时间（MDT）、1日龄雏鸡脑内致病指数（ICPI）。……