HPLC法测定盐酸氨基葡萄糖颗粒中盐酸氨基葡萄糖的含量*

杨华良，雷勇胜

(1.天津市中心妇产科医院，天津 300052； 2.天津药物研究院，天津 300193)

氨基葡萄糖是一种从天然甲壳质中提取的氨基己糖，是人体及动物体内关节组织中糖蛋白的天然成分。本品为白色结晶性粉末，分子式为C6H13NO5。氨基葡萄糖具有修复和维持软骨及关节功能的作用，可延缓骨性关节炎的病理过程和疾病进展。近年来国内外已成功的将其引入到全身骨关节炎的治疗和预防。冉兰等[1]采用比色法测定盐酸氨基葡萄糖片中盐酸氨基葡萄糖的含量，显色后在527nm处有最大吸收；庄旭琴[2]采用旋光度法测定盐酸氨基葡萄糖片中盐酸氨基葡萄糖的含量，但该方法专属性差，辅料也有可能产生影响；任连杰等[3]采用积分脉冲安培检测-高效阴离子交换色谱法测定盐酸氨基葡萄糖，优化了淋洗条件和积分脉冲安培检测条件；吴虹等[4]采用HPLC -ELSD测定盐酸氨基葡萄糖的含量；本方法参考最新的美国药典USP32 -NF27版[5]，采用HPLC-UV测定盐酸氨基葡萄糖颗粒的含量。本方法具有准确、简便、专属性强的特点。

1 仪器与试药

Agilent 1200高效液相色谱仪；盐酸氨基葡萄糖对照品(中国生物制品检定所，批号649-200001)；盐酸氨基葡萄糖颗粒(由湖北益康药业有限公司提供，批号091001、091002、091003，规格37.5 mg/片)；乙腈为色谱纯；水为纯净水，其余试剂为分析纯。

2 方法与结果

2.1色谱条件与系统适应性 Venusil XBP NH2色谱柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，流动相为乙腈-磷酸盐缓冲溶液67∶33(磷酸盐缓冲溶液的配制：称取7.0 g磷酸氢二钾溶解在适量水中，加0.5 ml的氢氧化铵，加水稀释到2 000 ml。用磷酸调节pH值至7.0)，检测波长：195 nm，流速为1.5 ml/min，进样量为10 μl ，柱温：35 ℃。拖尾因子不大于2.0，理论塔板数不低于1 500。

2.2溶液制备

2.2.1稀释溶液 乙腈-水(1∶1)。

2.2.2对照品溶液 取盐酸氨基葡萄糖对照品适量，精密称定，置于10 ml量瓶中，用稀释溶液溶解，并稀释成含盐酸氨基葡萄糖3.75 mg/ml的溶液，混匀。

2.2.3供试品溶液 取盐酸氨基葡萄糖颗粒适量(约相当于含盐酸氨基葡萄糖37.5 mg)，研细，精密称定，置于10 ml量瓶中，用稀释溶液溶解，并稀释成含盐酸氨基葡萄糖3.75 mg/ml的溶液，混匀。

2.2.4阴性溶液 取空白辅料颗粒约118.75 mg，用稀释溶液溶解并定容至10 ml。

分别取稀释溶液、空白溶液、对照品溶液、0.01 mol/L的盐酸溶液与氯化钠溶液各10 μl注入液相色谱仪。结论：在此色谱条件下，氯离子和氨基葡萄糖主峰能够得到很好的分离。空白辅料对盐酸氨基葡萄糖的测定无干扰，见图1。

2.3破坏试验 取批号为091001的盐酸氨基葡萄糖颗粒约156.25 mg，加稀释溶液溶解，分别进行酸(滴加1 ml 0.1 mol/L氢氧化钠溶液，水浴加热2 h)、碱(滴加1 ml 0.1 mol/L盐酸溶液，水浴加热2 h)、光照(日光照射3 d)、加热(水浴加热30 min，冷却)、氧化(加过氧化氢溶液1 ml，摇匀，放置2.5 h)分解破坏。与破坏前相比，颗粒剂在酸、碱、氧化破坏下不稳定；在加热、光照破坏下较稳定。空白辅料颗粒在酸、碱、氧化、光照破坏下不稳定；在加热破坏下较稳定，分解出来的杂质都能与主成分峰分离良好。见图2。

2.4最小检测浓度、定量限及定量限重复性试验 取供试品溶液加稀释溶液溶解，逐渐稀释，当信噪比约为3∶1时，盐酸氨基葡萄糖的最小检测浓度为0.02 mg/ml。当信噪比约为10∶1时，盐酸氨基葡萄糖的定量限为0.08 mg/ml。定量限重复性试验，连续测定6次， RSD为0.68%。

2.5线性关系试验 取供试品溶液，分别进样4、6、8、10、15、20和25 μl，记录色谱图。结果表明，进样量在0.015～0.093 75 mg范围内，线性关系良好。回归方程Y=49.562 9+56 377.198 84X(r=0.999 9)。

2.6稳定性试验 取对照品溶液，分别在放置0、4、6、8、10、12和24 h测定， RSD为2.27%，表明，溶液在12 h内基本稳定。

1.盐酸氨基葡萄糖

2.7样品溶液重复性试验 取同一批号样品7份，照“2.2.3”项下方法制备供试品溶液，照“2.1”项下色谱条件重复进样，测定盐酸氨基葡萄糖含量的RSD为0.18%(n=7)。

1.盐酸氨基葡萄糖

2.8回收率试验 精密称取盐酸氨基葡萄糖对照品适量，加入处方量的已研细空白辅料，配制成含盐酸氨基葡萄糖3.0、3.75和4.5 mg/ml的测试溶液。量取对照品溶液、测试溶液各10 μl，按“2.1”项下色谱条件进样测定，按外标法计算回收率。结果平均回收率为104.55%,RSD为0.61%,见表1。

表1 回收率试验结果

2.9样品测定 取3批样品(批号091001、091002、091003)，照“2.2.3”项下方法制备溶液，并取“2.2.2”项下对照品溶液，按“2.1”项下色谱条件进样测定，按外标法以峰面积计算。结果3批样品的含量分别为标示量的96.88%、97.50%、96.84%。限度暂定为本品含盐酸氨基葡萄糖(C6H13NO5·HCl)为标示量的96.0 %～98.0%。结果均符合规定。

3 讨论

本法采用高效液相色谱法，通过色谱柱筛选，选用了柱效相对较高的Venusil XBP NH2色谱柱，调节流动相乙腈-磷酸盐缓冲溶液的比例，使实验获得了很好的结果。方法简便、快捷，有较好的准确度和精密度。

1 冉兰,张榕,文霞,等.比色法测定盐酸氨基葡萄糖片的含量.华西药学杂志,2001,16(3):217

2 庄旭琴. 旋光度法测定盐酸氨基葡萄糖片的含量.安徽医药, 2006,10(12):930

3 任连杰,山广志,李 群,等.积分脉冲安培检测-高效阴离子交换色谱法测定盐酸氨基葡萄糖口腔崩解片含量.中国生化药物杂志,2009,30(5):323

4 吴 虹,顾宏霞,王效山.HPLC-ELSD测定盐酸氨基葡萄糖含量.安徽中医学院学报，2008,27(2):41

5 USP32.NF27 .2010:1029