高氧环境下肺成纤维细胞RB蛋白磷酸化状态的改变*

赵诗萌 魏 兵 吴红敏 薛辛东

早产儿慢性肺疾病（chronic lung disease，CLD）是早产儿长时间吸入高浓度氧后最常见的并发症，其晚期病理结局是肺间质纤维化，表现为肺成纤维细胞（lung fibrolast，LF）的过度增殖[1]。G1/S是细胞周期的关键性调控点，高氧通过抑制G1/S调控点的作用，促使LF更多地从G1期进入S期，导致LF过度增殖[2]。RB基因是G1/S调控点的核心，有磷酸化及非磷酸化2种形式，其中RB磷酸化的RB蛋白可能参与对细胞增殖的负调控作用。本研究的主要目的是通过检测CLD鼠不同发展阶段LF总RB蛋白及磷酸化RB蛋白的表达,探讨RB基因在CLD鼠肺间质纤维化中的作用。

1 材料与方法

1.1 实验动物及分组 健康成年雌性SD大鼠60只，成年雄性SD大鼠15只，清洁级，体质量220～240 g，购自中国医科大学附属盛京医院实验动物部，雌雄交配（4∶1）。将孕22～23 d自然分娩的新生SD大鼠共120只（连同母鼠）随机分为空气对照组和高氧组，每组60只新生鼠及30只母鼠。高氧组于生后12 h内置于玻璃氧箱（60 cm×50 cm×40 cm）中，持续输入氧气，维持吸入气体氧浓度（FiO2）体积分数在0.85，用钠石灰吸收CO2，使其体积分数为0.005。温度22℃～25℃，湿度50%～70%，每天定时开箱30 min，添加水、饲料及更换垫料，并与空气组交换母鼠以免因氧中毒而导致喂养能力下降。空气组置于同一室内空气中（FiO2的体积分数为0.21），饲养条件与高氧组相同。

1.2 实验方法

1.2.1 肺成纤维细胞原代培养 分别于实验后3、7、14、21 d随机处死动物后，无菌条件下采集肺组织，进行LF细胞的原代培养[3]。待细胞铺满瓶底后按1∶2传代，收集第3代细胞用于实验[3]。

1.2.2 免疫组化技术检测总RB及磷酸化RB蛋白表达 取同代细胞接种于盖玻片上，第2天取出盖玻片用4%多聚甲醛固定。……