高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒HuN4株感染性分子克隆的建立及拯救病毒的鉴定

张善瑞，周艳君，朱建平，童 武，姜一峰，童光志

(中国农业科学院上海兽医研究所/猪传染病研究室，上海200241)

猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus，PRRSV)为有囊膜的单股正链RNA病毒，属于尼多病毒目动脉炎病毒科动脉炎病毒属。PRRSV分为以LV株(Lelystad virus)为代表欧洲型和以VR-2332株为代表的北美型[1-4]。PRRSV基因组长约15 kb，在5'端有帽子结构，3'端有poly(A)尾，共包含9个阅读框(ORF)，其中ORF1a和1b位于病毒基因组5'端非编码区(UTR)之后，编码RNA复制酶和转录相关蛋白，而ORF2～7分别编码病毒的结构蛋白 GP2a、GP2b、GP3、GP4、GP5、M和N[5-6]。PRRSV可感染引起猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)，一种以怀孕母猪发生流产、早产和死胎等严重的繁殖障碍和仔猪与育肥猪的呼吸道症状为特征的传染病[7]。20世纪80年代末北美和欧洲相继爆发PRRS，该病对全球养猪业造成了严重的危害[8]。

2006年在我国南方一些省份的猪场爆发了一种猪“高热”综合症，发病猪主要表现为体温高、发病率高和死亡率高等的临床特点，随后经研究证实该病的主要病原为发生缺失变异的PRRSV[9-12]。目前，人们对PRRSV的致病机理、病毒毒力变异的机制以及持续性感染发生的机理等诸多问题尚不十分清楚，反向遗传操作系统的建立将有助于从分子水平上阐明这些问题[13]。1998年Meulenberg等建立了第一个PRRSV反向遗传学技术平台，其它不同PRRSV株的感染性克隆也相继由不同的实验室构建成功[14-16]。这些PRRSV的反向遗传学平台大都属于欧美经典PRRSV株，而关于高致病性PRRSV株的感染性克隆相关研究报道较少[17]。为此，本研究通过构建高致病性PRRSV HuN4株的感染性克隆，建立PRRSV强毒株反向遗传操作系统，为研究该病毒的生物学特性以及致病机理奠定基础。……