低黏度包埋剂在肾活检电镜标本制备中的应用

朱小东 曾彩虹 陈惠萍

肾活检病理诊断由光镜、免疫荧光、电镜三部分组成，电镜技术对肾脏病的诊断及分类具有极其重要的作用。环氧树脂Epon 812是目前肾活检常规电镜检查中应用最广泛的包埋树脂，但聚合硬化时间长以致电镜标本制作周期较长，影响临床及时获取电镜观察结果。有报道Eponate 12作为一种黏度低、渗透作用快、聚合时间短的电镜包埋剂已应用于快速电镜技术，本文拟探讨低黏度包埋剂Eponate 12在肾活检电镜中的应用，旨在更好地提供肾活检患者超微结构改变特点以满足临床诊断的需要。

材料与方法

标本来源 选取40例南京军区南京总医院全军肾脏病研究所常规肾活检电镜标本，分为实验组和对照组各20例，每组包括IgA肾病(IgAN)5例、膜性肾病(MN)5例、狼疮性肾炎(LN)5例、局灶节段性肾小球硬化(FSGS)5例。

试剂及配制 Eponate 12 Resin Kit With DMP-30(Product No.18010 TED PELLA.ICN，USA)，Epon 812、甲基内次甲基二甲酸酐(NMA)、十二烷基琥珀酸酐(DDSA)、25%戊二醛、2%四氧化锇、醋酸铀及柠檬酸铅(均购置SPI.USA)。混合包埋剂配制方法(以配制50 ml左右为例，单位ml)，Eponate 12包埋剂采用“HARD”配方，即 Eponate 12∶DDSA∶NMA∶DMP-30比例为 25.7∶9.3∶16.5∶0.8;Epon 812 包埋剂采用夏季配方，即Epon 812∶DDSA∶NMA∶DMP-30 比例为 25∶6.2∶18.9∶0.8。

实验方法

取材与固定 两组标本取材与固定处理程序相同。具体步骤:(1)取材、前固定，锋利刀片切取1 mm3的组织块，用专用镊子轻夹放入4℃预冷的3.75%戊二醛电镜固定液中，放置4℃冰箱固定4h;(2)漂洗，0.1M PBS缓冲液漂洗15 min×3次;(3)后固定、漂洗，1%锇酸4℃固定1h;双蒸水漂洗5 min×3次。

脱水、浸透与包埋、聚合

实验组 梯度乙醇脱水:50%乙醇10 min×1次，70%乙醇10 min×1次，90%乙醇10 min×1次，100%乙醇10 min×3次;浸透、包埋:环氧丙烷10 min×3次;Eponate 12混合包埋剂∶环氧丙烷比例为1∶1浸透1h，Eponate 12混合包埋剂浸透3h。……