CpG ODN联合凋亡肿瘤细胞相关抗原致敏树突状细胞杀伤SKOV3卵巢癌细胞的实验研究

叶明珠,李 娜,黄秀敏

(厦门大学附属中山医院妇产科,福建厦门 361004）

肿瘤免疫的最终目的即达到杀伤肿瘤细胞、阻止肿瘤的复发和转移。以往单纯利用凋亡肿瘤细胞作为肿瘤免疫的初始抗原,其因抗原性弱,难以达到理想的抗肿瘤免疫效果。近年来的动物实验研究表明,人工模拟细菌基因组DNA合成的含有至少一个未甲基化“CpG基序”的单链寡脱氧核苷酸是一类新型的免疫制剂,具有强效的免疫刺激功能。它能够以病原相关的分子模式(pathogen-associated molecular pattern,PAMP）,促进多种免疫细胞的活化,进而诱导机体产生特异性抗肿瘤免疫反应及持久的保护性免疫反应[1]。本研究采用人工合成的CpG ODN2006联合凋亡的SKOV3卵巢癌细胞相关抗原(tumor associated antigens,TAAs）体外冲击致敏DCs,探讨CpG ODN对DCs促分化成熟的作用;同时体外观察致敏DCs对细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocytes,CTLs）杀伤SKOV3卵巢癌细胞活性的影响,以期为CpG ODN联合TAAs在抗卵巢癌免疫中的应用提供一些重要的实验依据。

1 材料与方法

1.1 实验材料人外周血每份20 ml,肝素抗凝;人卵巢癌细胞株SKOV3、人宫颈癌细胞株Hela、人肺癌细胞株Lewis由吉林大学病理教研室提供。

1.2 主要试剂CpG-ODN2006(5'-tcgtcgttttgtcgttttgtcgtt-3'）,由上海生工生物工程技术服务有限公司合成,全硫代磷酸化修饰,PAGE纯化。MTT(华美生物工程公司）;丝裂霉素C(Sigma公司）;异硫氰酸荧光素(FITC）标记的CD1α、CD83、CD86和HLA-DR 单克隆抗体(BD Pharmingen公司）;GM-CSF/IL-4(Sigma Aderch公司）;IL-12 ELISA试剂盒(晶美生物工程有限公司）;RPMI1640培养基(Gibco公司）;淋巴细胞分离液(鼎国试剂公司）。

1.3 方法

1.3.1 人外周血单核细胞的分离和培养 取人外周血20 ml,肝素抗凝,用等体积Hanks液稀释后加入淋巴细胞分离液,1 500 r/min离心15 min,吸取界面细胞即获得外周血单核细胞,PBS洗涤2次。……