柑橘试管内茎尖微芽嫁接技术试验初报

罗君琴，李 丽，聂振朋，徐建国，柯甫志，孙建华

(浙江省柑橘研究所，浙江 黄岩 318020)

茎尖微芽嫁接技术通过将不带毒的茎尖分生组织作接穗嫁接到不带毒的幼砧上进行试管内培养，获取完整的脱毒植株［1－4］，既能利用不带毒茎尖进行嫁接，又能解决果树茎尖组培难生根问题，为此，作者进行不同嫁接方式、接穗品种、嫁接时期对柑橘微芽嫁接成活影响的试验。

1 材料和方法

1.1 试验材料

柑橘试管内微芽嫁接各品种的接穗茎尖及砧木种子均取自浙江省柑橘研究所柑橘试验基地。

1.2 试管内微芽嫁接基本操作步骤

1.2.1 砧木培养

取枳壳种子，无菌条件下剥去内外种皮，常规表面杀菌，接种于MT固体培养基，(27±1)℃温度条件下暗培养2～3周，获取黄化苗用作试管内微芽嫁接砧木。

1.2.2 接穗准备

柑橘嫩梢抽发期，采集约2 cm长茎尖接穗洗净，超净工作台上切取约1 cm长茎尖，放入已灭菌锥形瓶中表面消毒，无菌水冲洗后待用。

1.2.3 微芽嫁接

无菌条件下，取砧木苗从根茎交接处往上2～3 cm处切去顶端，同时保留实生根约3 cm。高倍体视显微镜下，接穗保留2～3个叶原基切取茎尖，切下的茎尖快速移至砧木“L”形或“△”形嫁接切口处，使尽可能多地粘合在一起。嫁接苗转入MT液态培养基，(25±2)℃温度、1 500～2 500 lx光强、12 h·d－1光照条件下试管内培养。

1.3 试验设计

1.3.1 不同嫁接方式

试验采用“L”形、 “△”形2种嫁接方式。“L”形嫁接法在砧木去顶端切口横截面中间往下纵切2 mm长左右再横切一刀，在砧木顶部形成“L”形切口;“△”形嫁接法在砧木根茎交接处往上1.5～2 cm位置韧皮部开小三角形。2种嫁接方式各嫁接40个单株，接后15及30 d观察记录茎尖存活及萌芽率。

1.3.2 不同柑橘接穗品种

微芽嫁接茎尖接穗分别选用温州蜜柑、本地早蜜橘、秋辉、红玉葡萄柚×大谷伊予柑杂交后代(下文简称杂柑)、黄皮 (柑橘亚科黄皮族品种)5个不同品种。每一品种“△”形法嫁接15个茎尖，嫁接苗培养于MT液态培养基20 d后观察记录各接穗品种茎尖存活和萌芽率。

1.3.3 不同嫁接时期

通过大棚条件下自然抽梢及结合修剪促发新梢萌发，分别在3－10月各月采集本地早蜜橘嫩枝茎尖进行试管内微芽嫁接，每次嫁接15个茎尖，嫁接后20 d观察记录嫁接苗茎尖存活及萌芽率。

2 结果与分析

2.1 不同嫁接方式对柑橘试管内微芽嫁接成活影响

从表1可以看出，“△”形法嫁接方式接后15 d、30 d茎尖存活率明显高于“L”形嫁接法，这可能与“△”形嫁接切口更利于固定微芽茎尖和保湿有关。“△”形嫁接法接后30d茎尖萌芽率略高于“L”形嫁接法，但仍保持在较低水平，是否与嫁接接穗品种同砧木品种的嫁接亲和性有关，有待进一步试验。

表1 不同嫁接方式对本地早蜜橘微芽嫁接成活的影响

2.2 不同柑橘接穗品种试管内微芽嫁接成活比较

秋梢抽发期，采集温州蜜柑 (试验代号W)、本地早蜜橘 (试验代号 B)、秋辉 (试验代号 Q)、杂柑 (试验代号Z)、黄皮 (试验代号 H)5个品种嫩梢茎尖进行“△”形微芽嫁接，接后20 d观察记录嫁接苗茎尖存活率分别为60.0%、46.7%、20.0%、26.7%、90.0%，茎尖萌芽率分别为15.0%、6.7%、0、0、20.0%。从图 1可知，当嫁接砧木同为枳壳时，5个不同接穗品种试管内微芽嫁接成活顺序依次为:黄皮＞温州蜜柑＞本地早蜜橘＞杂柑＞秋辉，其中杂柑、秋辉微芽嫁接过程中接穗茎尖切口易出现褐化现象，不利于切面愈合。

图1 柑橘接穗品种试管内微芽嫁接成活比较

2.3 不同嫁接时期对柑橘微芽嫁接成活影响

图2 不同嫁接时期对本地早微芽嫁接成活影响

分别于3月19日、4月9日、5月17日、6月10日、7月8日、8月12日、9月8日及10月9日采集本地早蜜橘嫩梢进行试管内茎尖微芽嫁接试验，各月接后20 d嫁接苗茎尖存活率及萌芽率如图2所示。从图2不难看出，本地早蜜橘7、8月份夏秋梢抽发期微芽嫁接茎尖存活率和萌芽率明显高于3、4、5月份春梢及9、10月份晚秋梢抽发期。柑橘微芽嫁接成活一定程度上受季节影响，这可能与春梢抽发期采芽母本树同时伴有大量的花芽生长发育、晚秋时期气温下降柑橘茎尖自剪加速，影响到营养梢茎尖内部的生理活性有关。

3 小结

“L”形、“△”形微芽嫁接方式对柑橘试管内微芽嫁接茎尖存活有明显影响，“△”形嫁接方式优于“L”形嫁接方式，这可能与“△”形嫁接切口更利于固定微芽茎尖和保湿有关。

相同砧木不同接穗茎尖进行试管内微芽嫁接，接芽存活、萌芽率相差较大，本试验中5个接穗品种微芽嫁接成活率顺序依次为:黄皮＞温州蜜柑＞本地早蜜橘＞红玉葡萄柚×杂柑＞秋辉。

柑橘微芽嫁接成活一定程度上受季节影响，本地早蜜橘茎尖微芽嫁接存活及萌芽率以7、8月夏秋梢抽发期明显高于3、4、5月春梢及9、10月晚秋梢抽发期。

［1］张桂芳，贺红，徐鸿华．茎尖微嫁接技术脱毒佛手病原体的研究 ［J］．现代中药研究与实践，2010，24(2):27-30.

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［4］Mukhopadhyay S．Micropropagation of Darjeeling orange(Citrus reticulataBlanco)by shoot-tip grafting［J］． Journalof Hortscience，1997，72(3):493.