结核分枝杆菌环介导恒温扩增（LAMP）快速检测方法的评价

戴广明 曹以诚 杜正平 陈洵 黄曙海 逄宇 周杨 黄海荣 赵雁林

（1.北京结核病胸部肿瘤研究所 北京 101149；2.华南理工大学 广州 510640；3.广西疾病预防控制中心 南宁 530000）

细菌学检查是发现结核病传染源的主要途径和手段，是确定结核病诊断和化疗方案的重要依据。但由于敏感性低或所需时间过长等原因，致使结核病细菌学检查一直不能满足临床诊治的需求，存在延误诊断和误诊情况，同时也耽误了患者得到及时治疗的时间，影响了治疗效果，也使得疾病的传播难于控制。因此，缺乏早期、准确和廉价的诊断技术是制约全球结核病控制的严重障碍。

近年发展起来的环介导等温扩增技术（LAMP），完全突破了传统分子生物学检测技术需要昂贵仪器设备以及繁杂操作的限制，给分子生物学诊断技术的廉价普及带来了希望。该方法最初是由Notomi等［1]设计来用于病原微生物的检测，技术的工作原理是利用4条不同的特异性引物识别靶基因的6个特定区段，在等温条件下进行扩增反应。基因的扩增和产物的检测可一步完成，扩增效率高，可在15～60min扩增109～1010倍。所有靶基因序列的检测可只通过扩增产物的有、无来判别。结果的判断很简单，主要有以下两种方式：（1）反应结束后直接在紫外灯光下判读有无扩增反应产物形成；（2）核酸大量合成时，从dNTP析出的焦磷酸根离子与反应溶液中的Mg2＋结合，产生副产物焦磷酸镁沉淀，应用浊度仪检测沉淀浊度来判定［2]。由于方法简单易行，即使是没有分子生物学实验经验的技术人员也只需1周的训练就可掌握。……