乙型肝炎病毒核酸荧光定量及血清标志物与肝功能检测的临床意义

彭红波，刘亚丽，陈旭姿（.广州市番禺区何贤纪念医院检验科 5400；.广州市民政局精神病院老人区 5040；.广西壮族自治区桂林市75660部队门诊部 5400）

在我国60%的人感染过乙型肝炎病毒（HBV），在现患慢性肝炎患者中约80%以上为慢性乙型肝炎患者，而受HBV慢性感染的人群患原发性肝癌（HCC）的相对危险性至少增加300倍。所以，对HBV的防治仍然是我国健康与传染病控制中的首要问题。目前临床多用HBV血清标志物和HBV DNA的定量检测来反映HBV的复制情况，为判断病情和评价抗病毒药物疗效提供依据［1］。本文对荧光定量聚合酶链反应（FQPCR）检测HBV DNA，与HBV血清标志物［乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）、乙型肝炎病毒表面抗体（抗－HBs）、乙型肝炎病毒e抗原（HBeAg）、乙型肝炎病毒e抗体（抗－HBe）、乙型肝炎病毒核心抗体（抗－HBc）］不同模式及肝功能检测结果进行对比分析探讨，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 296例 HBV感染者血液标本，来自本院2008年1～6月传染科门诊及住院患者以及无症状体检者。

1.2 试剂与仪器 FQ－PCR检测试剂盒为上海科华生物技术有限公司产品。乙型肝炎血清标志物检测试剂盒由英科新创公司生产的酶联免疫吸附试验（ELISA）试剂盒。仪器：BIOERminiOpticon基因扩增仪，MK3酶标分析仪，Beckman全自动生化分析仪。

1.3 方法 HBV血清标志物用ELISA法测定，按试剂盒说明操作，结果由酶标仪判定。肝功能用Beckman全自动生化分析仪测定。HBV DNA用FQ－PCR检测。HBV DNA定量以1.00×103copy／mL为判定阳性的标准，＜1.00×103copy／mL判为阴性，＞1.00×103copy／mL判为阳性。

1.4 统计学处理 数据采用PEMS3.1统计分析软件处理。计数资料采用χ2检验，计量资料采用t检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 不同血清学模式HBV DNA检出结果 296例标本中，HBsAg阳性238例，HBeAg阳性99例，HBV DNA阳性179例。99例HBeAg阳性标本HBV DNA阳性，平均HBV DNA含量为1.21×107copy／mL，其 HBV DNA检出率与 HBeAg阴性模式比较差异有统计学意义（χ2＝94.759 7，P＜0.01）；HBsAg、HBeAg阳性标本中HBV DNA平均含量与HBsAg、抗HBe、抗－HBc阳性标本中HBV DNA平均含量比较，差异有统计学意义（t＝27.941 9，P＜0.01）。238例 HBsAg阳性标本中HBV DNA检出率与HBsAg阴性模式比较差异有统计学意义（χ2＝86.622 3，P＜0.01）。HBsAg、抗－HBc阳性标本中HBV DNA平均含量与仅抗－HBc阳性标本中HBV DNA平均含量比较，差异有统计学意义（t＝340.536 9，P＜0.01），见表1。

表1 不同HBV感染模式与HBV DNA定量结果比较

2.2 HBV DNA检出率与肝功能关系 肝功能正常与异常患者血清标本均可检出HBV DNA阳性，但两组检出率相比较差异有统计学意义（χ2＝112.015 2，P＜0.01），见表2。58例HBsAg阴性，且肝功能又正常的标本中检出了4例HBV DNA阳性。

表2 肝功能与HBV DNA检出率

3 讨 论

研究表明，FQ－PCR测定的HBV DNA的阳性率和含量与HBV标志物的不同血清学模式和肝功能结果有关，但有时并不一致。过去，ELISA检测HBV血清学标志物被广泛地应用于诊断HBV的感染状况［2］。以往的经验以为，血清 HBeAg阳性是HBV复制活跃、传染性强的标志，HBeAg的阴转或抗－HBe出现表示HBV感染的缓解或HBV的清除［3］。本研究结果表明，HBeAg阳性患者血清中HBV DNA阳性率及含量显著高于其他患者（P＜0.01）；但 HBeAg阴性时，抗－HBe阳性或阴性组也检出了高水平的HBV DNA。HBeAg阳性组的HBV DNA水平显著高于其阴性组，证实了HBeAg阳性是病毒在体内高度复制的指标之一。本研究中HBsAg阴性组检出了4例HBV DNA阳性，也可能是由于HBV新近感染或HBV隐性感染的恢复期。此种情况往往反映机体免疫力较强，有较好的转归。另外也说明，HBsAg与HBeAg阴性并不意味着病毒复制的停止，只能说明病毒复制水平极低。肝炎患者出现抗－HBs阳性，未必说明病情好转或HBV已被清除。病毒在复制过程中，同时也表达包装蛋白，这些异源蛋白激发机体免疫系统，产生相应的抗体。因此，抗原抗体反映了病毒的表达水平，也间接反映了病毒复制水平。但是由于HBV的表达和机体免疫反应的强弱受多种因素的影响［4］，因此免疫学指标在反映患者体内病毒复制情况时也有一定局限性。但免疫学指标与HBV DNA含量相结合，并结合临床资料，将能很好地判断HBV感染及其阶段。

过去常以HBeAg的阴转和肝功能恢复正常作为乙型肝炎临床治疗结束的标准［5］。本研究发现，虽然HBV DNA检出率的高低与肝功能是否正常有关，但当肝功能正常时，HBV DNA的检出率仍达23%，说明HBeAg的阴转和肝功能恢复正常并不代表体内病毒已清除，乙型肝炎已治愈。本研究结果表明，HBsAg阳性标本的HBV DNA阳性率及含量显著高于HBsAg阴性标本（P＜0.01）。

综上所述，在乙型肝炎的诊断方面，单纯依靠HBV血清标志物的检测结果来进行诊断和判断病情是不够的，应结合HBV DNA的检测和临床来进行综合分析，才能准确反映患者体内HBV复制的真实情况，从而为临床诊断和选择更合理的治疗方案提供可靠依据［6-7］。HBeAg的阴转和肝功能恢复正常也不能代表HBV已经清除［8］。又由于HBV的表达和机体免疫反应的强弱受多种因素的影响，因此在反映患者体内病毒复制情况时有很大的局限性。FQ－PCR能快速、准确定量测定HBV DNA，HBV DNA能准确地反映HBV在体内存在和复制情况。因此，FQ－PCR测定HBV DNA与HBV血清学标志物和肝功能检查相结合，在乙型肝炎病情诊断和监测治疗效果及进预后判断方面具有重要作用。

［1］童红莉，田亚平，邓心新.实时荧光定量PCR检测乙型肝炎病毒DNA的临床应用［J］.军医进修学院学报，2005，26（5）：344－345.

［2］Kwok S，Hignchi R.Avoiding false positives with PCR［J］.Nature，1989，339（6221）：237－238.

［3］朱平.实时荧光定量聚合酶链反应技术开始用于临床常规基因诊断［J］.中华检验医学杂志，2005，28（8）：778－778.

［4］吴晓蔓，郭海波，列海涛.HBV－DNA定量和定性聚合酶链反应及其临床实用性的探讨［J］.临床肝胆病杂志，2000，16（4）：226－227.

［5］肖艳群，陈慧英，张锦锋，等.实时荧光定量PCR与PCRELISA在乙型肝炎病毒DNA定量检测中的应用比较［J］.检验医学，2005，20（4）：319－320.

［6］陶敏，李玉，秦良谊.血清HBV－DNA定量检测的临床应用价值［J］.医学研究通讯，2005，34（9）：61－69.

［7］徐伟帆.420例乙型肝炎病毒DNA定量检测临床分析［J］.中国医药指南，2011，9（29）：135－136.

［8］Chemin I，Zoulim F，Merle P，et al.High incidence of hepatitis B infections among chronic hepatitis cases of unknown aetiology［J］.J Hepatol，2001，34（3）：447－454.