PTEN mRNA和Smad4 mRNA在甲状腺乳头状癌中的表达及意义

黄 亮，刘 镭，黄 旭，李青山，徐大为

(1.承德医学院附属医院，河北承德 067000;2.承德医学院)

甲状腺乳头状癌(PTC）是甲状腺癌中最常见的类型，约占甲状腺癌的60%-89%[1]。PTC有许多组织学变型，它们的临床特点、病理改变和预后差异较大。高明等[2]曾按颈淋巴结转移发生率的高低将PTC分为高、中、低转移变型组，各组之间肿瘤的侵袭性、淋巴结转移率及预后均有显著差异。PTEN基因和Smad4基因是近年发现的两种抑癌基因，与多条细胞信号转导通路相关，参与肿瘤的发生与发展。本研究采用实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR）方法检测了PTEN mRNA、Smad4 mRNA在PTC中的表达水平，并证实了它们与PTC侵袭及转移的关系。

1 材料与方法

1.1 一般资料 2009年3月-9月在天津医科大学附属肿瘤医院和承德医学院附属医院手术切除的新鲜组织标本，均经术后病理检查证实。PTC 94例，男22例、女72例，年龄4-81岁，中位年龄48岁;甲状腺腺瘤29例，男9例、女20例，年龄16-75岁，中位年龄44岁。同时，收集甲状腺癌旁组织94例。

1.2 标本收集 术中收集PTC病灶中央组织，癌旁组织距癌灶边缘至少1cm，甲状腺腺瘤组织约100mg。标本装入无菌管内，迅速投入液氮内冷冻。

1.3 提取总RNA和合成cDNA 参照Trizol说明书操作提取总RNA，所得RNA用75%乙醇洗涤后晾干，溶于20ml DEPC水中，测定RNA浓度及A260/A280，琼脂糖凝胶电泳检测RNA质量，选取A260/A280比值为1.8-2.0的RNA进行反转录，所得cDNA产物-20℃保存。

1.4 FQ-PCR PTEN、Smad4及内参照GAPDH的引物序列由北京奥科生物公司合成。PTEN上、下游引物序列分别为F-5’CCAGTCAGAGGCGCTAT 3’和R-5’AACTTGTCTTCCCGTCGTGT 3’(208bp);Smad4上下游引物序列分别为F-5’ATGACCTTCGTCGCTTA TGC 3’和R-5’GGCCCGGTGTAAGTGA 3’(119bp);GAPDH上下游引物序列分别为F-5’ATGGCCTCCAA GGAGTAAGAC 3’和R-5’GATGGTACATGACAAGG TGCG 3’(195bp)。20μl PCR 反应体系包括:10μl 2×SYBR Premix Ex TaqTM(Takara 公司)，0.4μl 50×ROX Reference Dye Ⅱ，10μmol/L的上、下游引物各1μL，1μL cDNA，GAPDH为内参照。……