PAR－2对心肌缺血再灌注损伤大鼠Bax和Bcl－2 mRNA表达的影响

刘 阳 李 莉 (三峡大学第一临床医学院 宜昌市中心人民医院心血管病研究所，湖北 宜昌 443001)

近年研究表明，蛋白酶激活受体－2(PAR－2)活化能明显缩小心肌缺血再灌注(ischemia－reperfusion，I/R)后的梗死面积，改善心脏功能〔1〕，但其机制尚未完全清楚。本实验采用大鼠心肌IR模型，观察不同剂量的SLIGRL－NH2活化PAR－2对大鼠心肌组织 Bax、Bcl－2 mRNA 表达的影响。

1 材料与方法

1.1 实验分组及处理 体重220～250 g的雄性SD大鼠40只，由华中科技大学同济医学院实验动物学部提供，动物合格证号为〔SCXK(鄂)2004－0007〕。随机分为假手术(sham)组、I/R 组和 SLIGRL－NH2(0.5，1，3 mg)组，每组 8 只。SLIGRL－NH2组:再灌注前5 min经颈外静脉注射0.5、1、3 mg/kg SLIGRLNH2，假手术组和I/R组注射等量生理盐水作为对照。SLIGRL－NH2(由上海生工生物工程技术服务有限公司合成)。

1.2 试剂与仪器 TRIZOL REAGENT，美国Invitrogen公司产品;SYBR ExScript TMRT－PCR kit(Perfect Real Time)，Takara 公司产品;荧光定量PCR扩增仪，美国MJ Research公司产品。

1.3 动物模型的制作 按文献〔2〕复制模型，以3%戊巴比妥钠(30 mg/kg)腹腔注射麻醉大鼠，气管切开插管连接微型动物呼吸机。辅助呼吸参数为:呼吸频率 50次/min，潮气量20 ml/kg，呼吸比1∶1。大头针穿刺四肢皮下接心电图机记录一段正常心电图作为对照。开胸、暴露心脏。I/R组和SLIGRL－NH2组以5/0缝线在左冠状动脉前降支根部穿线，在前降支上垫一塑料管一同结扎，缺血30 min后，剪断结扎线再灌注120 min。假手术组仅在左前降支下穿线不结扎，旷置150 min。1.4 大鼠心肌组织Bax、Bcl－2 mRNA表达的检测

1.4.1 抽提总RNA 心肌组织样本用 TRIZOL Reagent提取总RNA，按操作说明书进行。紫外分光光度分析及琼脂糖凝胶电泳检测总RNA的含量、纯度及完整性。引物序列如下:①目的基因 Bcl－2 上游引物序列:5′－TGAACCGGCATCTGCACAC－3′;下游引物序列:5′－CGTCTTCAGAGACAGCCAGGAG－3′。② Bax上游引物序列:5′－AGACACCTGAGCTGACCTTGGAG－3′;下游引物序列:5′－GTTGAAGTTGCCATCAGCAAACA－3′。……