重组表达小鼠MIP-1α和B7-1基因的慢病毒载体的构建及鉴定

刘 伟，余英豪

（中国人民解放军南京军区福州总医院病理科，福州 350025）

人体的抗肿瘤免疫反应主要是由激活的T淋巴细胞介导，T细胞激活需要双信号系统，第一信号是由T细胞受体（TCR）与抗原肽-MHC复合物相结合所提供，第二信号是由辅助分子或共刺激分子通过与T细胞上相应受体结合而传递的，其中以B7分子的共刺激作用最为重要，而肿瘤细胞表面往往缺乏或低表达B7分子，是肿瘤细胞逃避宿主免疫系统监视和灭杀的重要机制之一［1］。因此，通过转基因使肿瘤细胞表达 B7分子，为 T淋巴细胞激活提供第二信号，从而激活T细胞发挥抗肿瘤效应。MIP-1α类属 CC趋化因子，与其相应受体结合后诱导趋化T细胞、单核细胞、树突状细胞、NK细胞等免疫细胞，募集到肿瘤局部，产生抗肿瘤效应［2，3］。

从理论上推测，趋化因子 MIP-1α和共刺激分子B7-1基因转染淋巴瘤细胞后，机体抗淋巴瘤免疫作用可能会明显增强。为此，本研究拟建立重组表达小鼠MIP-1α和B7-1基因的慢病毒载体，为淋巴瘤基因治疗的实验研究奠定基础。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 慢病毒载体：慢病毒载体pGC-FU Vector购自上海吉凯基因化学技术有限公司。

1.1.2 菌株来源：大肠杆菌 DH5α由本实验室保存。

1.1.3 细胞株：293T细胞，由本实验室保存。

1.1.4 主要试剂：1 kp DNA ladder Marker，250 bp DNA ladder Marker（Fermentas公司）；AgeI，（NEB公司）；In-Fusion kit（BD 公 司）；Taq polymerase （SinoBio公司）；Plasm id抽提Kit（Promega公司）；一抗 Mouse Anti-GFP，二抗 Goat Anti-Mouse（Santa-Cruz公司）；Lipofectamine2000（Invitrogen公司）；MMLV逆转录酶（PROMEGA公司）。

1.1.5 主要仪器和器材：PCR 仪（Applied Biosystems公司）；稳压DNA电泳仪（BioRad公司）； SDS-PAGE蛋白电泳仪，蛋白转膜仪（上海天能公司）；5417R台式冷冻高速离心机（Eppendorf公司）；阳性克隆测序在上海美季生物技术公司完成。……