壮骨胶囊质量标准研究

王文化，张 杰，施务务

壮骨胶囊主要由当归、川芎、肉桂、地龙、丹参、冰片等15味中药组成，具有活血化瘀、行气止痛、补益肝肾、强筋壮骨。用于股骨颈骨折手术后股骨头缺血性坏死，骨坏死中晚期等症。为了控制制剂的质量，对冰片、当归、川芎进行薄层鉴别，建立了高效液相色谱法测定本品中肉桂酸的含量。

1 仪器与试剂

1.1 仪器 高效液相色谱仪:Agilent 1100;日本岛津SPD-10A VP、LC-10AT VP;超声清洗机(JCX-300 W，山东济宁超声电子仪器厂)。

1.2 试剂 当归对照药材、川芎对照药材、冰片、肉桂酸对照品(均购自中国药品生物制品检定所，批号分别为:120927-200310、120918-200507、110743-200303、110786-200403)，硅胶G(青岛海洋化工厂)，甲醇为色谱纯，水为自制超纯水，其余试剂均为分析纯。

2 方法

2.1 薄层色谱鉴别

2.1.1 冰片的鉴别［1］取本品内容物以及按处方制法制的缺冰片的阴性对照各1 g，加乙醚5 ml，超声处理5 min，滤过，滤液作为供试品溶液;另取冰片对照品适量，加乙醚制成每毫升含1 mg 的溶液，作为对照品溶液。吸取供试品溶液4 μl，对照品溶液2 μl，分别点于同一硅胶G 薄层板上，以甲苯-醋酸乙酯(19:1)为展开剂，用展开剂饱和15 min，展开，取出，晾干，喷以1%香草醛硫酸溶液，105℃烘干至斑点清晰。供试品色谱中，检出冰片。阴性无干扰。见图1。

图1 冰片薄层色谱

2.1.2 当归、川芎的鉴别［2］取本品内容物以及按处方制法制的缺当归以及川芎的阴性对照品各2 g，加乙醚30 ml，超声处理20 min，滤过，滤液低温挥干，残渣加乙醇2 ml 使溶解，作为供试品溶液;另取当归、川芎对照药材适量，加乙醚15 ml，超声处理20 min，滤过，滤液挥干，残渣加乙醇溶液1 ml 使溶解，作为对照药材溶液。吸取上述4 种溶液各5 μl，分别点于同一硅胶G 薄层板上，以醋酸乙酯－石油醚(60℃～90℃)(15:85)为展开剂，用展开剂饱和15min，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，检出当归及川芎。阴性对照无干扰。见图2。

2.2 含量测定［3-5］

2.2.1 色谱条件与系统适用性试验 色谱柱:依利特 Hypersil(ODS 25 μm，4.6 mm×250 mm);以甲醇－0.1%磷酸溶液(55:45)为流动相;检测波长为278 nm;柱温为室温;流速为1 ml/min;进样量为20 μl。

图2 当归薄层色谱

2.2.2 对照品液的制备 精密称取肉桂酸对照品适量，加甲醇制成每1 ml 含6 μg 的溶液，即得。

2.2.3 供试品液的制备 取装量差异项下本品内容物，研细，取适量，精确称定，置具塞锥形瓶中，精密加入25 ml 甲醇，密塞，称量定重，超声处理30 min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，静置，滤过(0.45 μm 滤膜)，取续滤液，即得。

2.2.4 阴性样品溶液的制备 按处方制备不含肉挂酸的阴性样品，按供试品溶液制备方法制得。

2.2.5 方法学考察 专属性试验:照上述色谱条件，分别取对照品溶液、供试品溶液和阴性样品溶液进行进样测定，色谱图见图3。肉桂酸的保留时间在17.5 min，阴性样品溶液对测定无干扰。

图3 A:肉桂酸对照品 B:壮骨胶囊样品 C:阴性样品

2.2.5.1 线性关系考察 精密吸取不同质量浓度的对照品溶液，分别进行测定，以峰面积对进样量进行线性回归处理，得回归方程为:Y =1383113.3 X－71972.90，R =0.9999(n =5)。结果表明肉桂酸进样量在24.56～172.8 ng 范围内与峰面积积分值具有良好线性关系。

2.2.5.2 精密度试验 精密吸取对照品溶液，连续进样6 次测定。依法测定肉桂酸峰面积，结果其RSD 值为1.67%(n =6)，表明精密度良好。

2.2.5.3 稳定性试验 吸取同一批供试品溶液，分别于0，2，4，8，12，24 h 进样，依法测定肉桂酸峰面积，结果RSD 值为1.14%。表明供试品溶液稳定。

2.2.5.4 重复性试验 取同一批号样品，平行测定6 次。结果RSD=2.02%(n=6)。表明方法重复性良好。

2.2.5.5 回收率试验 取已测知含量的样品6 份，精密称定，精密加入一定量肉桂酸对照品。照上述供试品制备方法制备供试品溶液，按含量测定方法测定肉桂酸含量，并计算回收率，结果平均回收率为99.80%，RSD 为1.15%。

2.2.6 样品含量测定 按上述色谱条件依法测定3 批样品中肉桂酸的含量，结果3 批样品中肉桂酸的含量分别为:0.2196，0.2525，0.2722 mg/g。

3 讨论

本方为中药复方制剂，本文所建立的冰片、当归、川芎的薄层鉴别方法，专属性强、操作简便、方法重现性良好等优点。由于当归和川芎含有主要共性成分，因此薄层色谱鉴别阴性对照采用双缺味，可为含当归和川芎的制剂的色谱鉴别提供方法和依据。

冰片在制剂过程中容易挥发而影响含量，对进行了薄层鉴别，有利控制制剂的质量和监控生产工艺。

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