乙型肝炎核心抗体阳性与DNA之间的关系

邵 华（徐州医学院附属第三医院检验科，江苏 徐州 221003）

乙型肝炎是一种严重威胁人类健康的传染病，据世界卫生组织估计，每年有100万人死于本病，我国为乙型肝炎高发区，约有1.2亿人为乙型肝炎病毒（HBV）携带者［1］。据全国病毒性肝炎流行病学调查结果，在我国一般人群中乙型肝炎病核心抗体（抗－HBc）阳性率为49.8%，其中多数人为单项抗－HBc阳性。本文针对酶联免疫吸附试验（ELISA）测定的单项抗－HBc阳性的血清，用聚合酶链反应（PCR）检测其HBV DNA的含量，并探讨其相关性。

1 材料与方法

1.1 标本来源 血清标本来源于本院2008年8月至2011年5月的门诊和住院患者的HBV标志物检测中单纯抗－HBc阳性的标本共计376份，其中男205例，女171例，年龄18～65岁。

1.2 仪器与试剂 血清标志物仪器为BIO RAD－680酶标仪测定，采用上海科华有限公司ELISA试剂盒。HBV DNA检测仪器为罗氏公司Lightcycler 3.0荧光定量扩增仪，检测试剂由广州达安生物公司提供。

1.3 方法 HBV标志物采用ELISA进行检测，严格按说明操作书，结果由BR－680酶标仪测定，每一批标本均设阴阳性和临界对照。荧光定量PCR测定HBV DNA严格按试剂盒说明书和仪器厂家提供的方法进行。每次试验设立4个HBV DNA标准品系列浓度，分别为1×104、1×105、1×106、1×107，其检测灵敏度为1×103copy／mL，严格按照Agrawal等［2］提出的防污染措施进行试验操作。

2 结 果

定量结果采用HBV DNA拷贝数，试验结果显示，在376例HBC阳性患者中，HBV DNA阳性有21例，阳性率为5.58%。其中拷贝数在103以下的有7例，拷贝数在103～104之间的为9例，拷贝数在104～105之间的为4例，拷贝数在105～106的为1例。

3 讨 论

本研究结果表明，376例抗－HBc阳性患者中，HBV DNA的阳性率为5.58%，低于文献［3］报道7.14%的阳性率，可能与病毒的区域分布或基因突变有关。HBV标志物是HBV感染的实验室传统检测手段，它检测的是抗原抗体，是反映人体对HBV的免疫应答状态。由于HBV的表达和机体免疫反应的强弱受多种因素影响，因此，反映患者体内病毒复制时有一定局限性［4］。特别是对于单纯抗－HBc阳性的患者，很难判断出其体内有无病毒复制。而PCR技术可检测病毒的DNA，即HBV的拷贝数，能准确地反映病程变化和治疗恢复情况。HBV标志物检测不能明确说明HBV在体内的活动情况，由于受免疫学方法灵敏度的限制很难检测出低水平状态下的HBV复制情况，而PCR就可以很准确地检测出来，所以结合HBV血清标志物检测HBV DNA对临床早期诊断和治疗乙型肝炎意义更大［5］。

人感染HBV后，血清中首先出现HBV DNA阳性，约1个月后出现乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）和e抗原（HBeAg）阳性，尔后出现抗－HBc阳性等。随着病情的逐渐好转，血清中HBV DNA、HBsAg和HBeAg先后转为阴性，在HBsAg消失后隔一段时间，出现乙型肝炎表面抗体（抗－HBs）。此时抗－HBc与抗－HBs可同时阳性。由于抗－HBs在血清中持续存在时间较抗－HBc短，因此，经过一段时间后，抗－HBs消失，仅单项抗－HBc阳性。因此，单项抗－HBc阳性，特别是抗－HBc低水平阳性，表示既往感染过HBV，现已康复。但也有一部分单项抗－HBc阳性者，特别是抗－HBc高水平阳性者，其体内仍有HBV复制，但因病毒复制水平低，不易用常规方法检出。但用敏感的HBV DNA扩增法检测，可发现他们的HBV DNA阳性。因此，当机体抵抗力下降时，病毒复制活跃，他们可再次复发乙型肝炎。本研究资料提示，单凭HBV血清标志物的测定结果判定体内HBV的复制及传染性是不够的，而采用荧光定量PCR检测HBV DNA能更准确、直接地反映体内病毒复制情况，因此动态观察血清HBV DNA的变化，对于病毒感染的转归、病情及预后的判断更具有临床意义。随访时HBV DNA水平明显升高，提供病毒仍在复制，病情可能出现反复或加重，所以HBV DNA检测在评价和监测抗病毒药物疗效等方面具有十分重要的临床价值。HBV DNA定量检测能正确反映病毒复制情况，是乙型肝炎治疗有效的直接疗效指标［6］。

以上分析表明，单纯依靠HBV血清标志物的检测结果只能较好地反映机体对HBV感染的免疫应答状况，而荧光定量PCR可以定量检测HBV DNA的浓度，且灵敏度高，特异性强，更能清楚地反映乙型肝炎患者的病毒活动程度，真实地反映HBV的感染和复制情况，目前可认为PCR定量检测HBV DNA是诊断病毒是否复制的金标准［7］。作为临床医生只有将两种方法有机地结合起来，对HBV标志物中单纯抗－HBc阳性的患者进行综合分析，才能对临床诊断、治疗方案设计、药物疗效观察提供可靠的依据。

［1］刘树林，邹菊贤.PCR检测 HBV－DNA与 HBV血清标志物常见模式和Pre－S2相互关系研究［J］.重庆医学，2001，30（2）：100－101.

［2］Agrawal V，Roy N.Contaminating insert degradation by preincubation colony PCR：a method for avoiding false positives in transformant screening［J］.Anal Biochem，2008，375（1）：159－161.

［3］王晓东，李秀全，李凤换，等.慢性乙肝血清标志物与HBV－DNA水平的关系［J］.国际检验医学杂志，2006，27（12）：1070－1072.

［4］Chemin I，Zoulim F，Merle P，et al.High incidence of hepatitis B infections among chronic hepatitis cases of unknown aetiology［J］.Hepatol，2001，34（3）：447－454.

［5］章家新，吴统健，郭永炼，等.荧光定量聚合酶链反应检测乙型肝炎病毒DNA及其临床价值［J］.汕头大学医学院学报，2005，18（2）：108－109.

［6］李金明.乙肝肝炎病毒血清标志物测定及结果解释的若干问题［J］.中华检验医学杂志，2006，29（5）：385－389.

［7］骆抗先.乙型肝炎基础和临床［M］.2版.北京：人民卫生出版社，2001：257.