人骨髓间充质干细胞与血管内皮细胞的基因表达差异分析

刘丹丹 陈丽琼 仇 容 银国利 沈香娣

间充质干细胞(mesenchymal stem cells，MSCs)是一种多能成体干细胞，因具有取材方便、增殖能力强、免疫原性低和广泛的分化潜能而成为目前细胞治疗、基因治疗和组织工程方面的研究热点。不同组织来源的MSCs在血管内皮生长因子(VEGF)、表皮生长因子(EGF)、碱性成纤维生长因子(bFGF)、地塞米松、低血清或无血清培养基等多种诱导体系的作用下，可以成功地定向分化为血管内皮细胞，不同程度表达内皮细胞相关表型，甚至形成血管网络样结构，成为血管组织工程和缺血组织细胞移植的理想种子细胞［1～3］。但MSCs分化为内皮细胞的机制目前尚不清楚，其分化过程的调控靶标尚未确立。本实验采用基因芯片技术对人骨髓间充质干细胞(hMSCs)和脐静脉内皮细胞(hUVECs)进行了基因组规模的表达差异分析，结果报告如下。

材料与方法

1.材料:hMSCs和hUVECs分别从健康志愿成人骨髓、脐带静脉分离获得;淋巴细胞分离液percoll、低糖DMEM培养基购自GIBCO;优等胎牛血清购自HYCLONE;UNIQ—10柱式RNA抽提试剂盒购自上海生工;基因芯片BiostarH—40S为上海博星基因公司产品。

2.方法:(1)hMSCs的分离、培养:取健康成人骨髓5～10ml，离心沉淀血细胞，叠加到percoll分离液上，离心后吸取单个核细胞层，10%FBS的L-DMEM悬起，接种于24孔培养板中。3天后换液，hMSCs贴壁生长。以后每3天换液，细胞80%融合，传代扩大培养，收集P5～P6代细胞待用。(2)hUVECs的分离、培养:酶消化法收集hUVECs，接种于培养瓶中，加M200培养基，扩增培养传至P3代备用。(3)hMSCs和hUVECs RNA的提取、分析:收集hMSCs和hUVECs各约(1～2)×107细胞，UNIQ-10柱式RNA抽提试剂盒分离细胞总RNA，测定所提RNA的OD260、OD280，计算RNA含量及纯度。……