耐甲氧西林金黄色葡萄球菌感染监测及同源性分析

吴晓红，王 震，施 瑜，曹珍娣，印夏薇

（镇江市第二人民医院检验科1、感染管理科2，江苏 镇江 212002）

近年来,耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(Methicillin-resistant Staphylococcus aureus，MRSA)引起的感染日趋严重。MRSA呈多重耐药表型[1-2]，因此，对MRSA的临床分布情况和耐药性进行监测，并寻找导致MRSA院内感染的途径，对控制MRSA院内感染，规范合理地使用抗生素有重要的指导意义。

1 资料与方法

1.1 研究对象 选择2005年2月至2010年3月从我院临床标本中（包括痰、咽拭子、尿液、血液、胸水、腹水、胆汁、伤口分泌物、脓液、静脉导管等）分离出的金黄色葡萄球菌85株，去除同一患者重复分离菌株；从医护人员手、床单、床头柜和医疗器械等院感监测标本中分离出的金黄色葡萄球菌32株，共计117株。

1.2 方法 当临床实验室检测出MRSA菌株后，即刻通知院感人员到病房做多点采样。细菌的分离培养及鉴定按《全国临床检验操作规程》第3版操作。药敏试验采用K-B法进行，结果的判读按美国国家临床实验室标准化委员会（CLSI）2008年标准进行，用WHONET 5.3软件分析。

1.3 MRSA的检测 M-H琼脂中加入2%Na-Cl，121℃20 min高压灭菌后，在9 cm平皿中浇25 ml琼脂，制成4 mm厚培养基，贴30 μg/片的头孢西丁（FOX）纸片，35℃，24 h。抑菌圈直径≤19 mm判为MRSA。质控菌株：金葡菌ATCC 25923，由浙江杭州天和微生物试剂公司提供。MRSA阳性对照菌株（JS0405）由江苏省临床检验中心程梅老师提供。确诊方法采用多重PCR方法，以nuc基因和mecA基因合成两对引物，在279 bp和310 bp处出现扩增条带表示MRSA。具体方法见文献[3]。

1.4 重复一致序列(ERIC)-PCR 选择肠道菌广泛存在菌体DNA中的重复序列ERIC-2(5'-AAG TAA GTG ACT GGG GTG AGC G-3')作 为 引 物[4]。ERIC-PCR 扩增体系：10×Buffer 2.5 μl、MgCl2(2.5 mmol/L)2.5 μl、dNTP(0.2 mmol/L)2.0 μ l、Taq Polymerase 2 U、引物各25 pmol、模板DNA(煮沸法制备)3 μl，添加灭菌去离子水至 25 μl；……