氯化两面针碱对人肝癌裸鼠移植瘤基因表达谱的影响

刘丽敏，刘华钢

(广西医科大学药学院，广西南宁 530021)

氯化两面针碱(nitidine chloride，NC)是从广西特有药用植物两面针［Zanthoxylum nitidum(Roxb)DC］的根中分离到的具有抗肿瘤活性的生物碱，本课题组前期的研究结果表明NC能抑制多种肿瘤细胞的生长，给药剂量为10 mg·kg－1时NC对人肝癌HepG2裸小鼠移植瘤的抑瘤率为60.91%，与环磷酰胺疗效相近［1－2］，具有较强的体内外抗肿瘤活性。为了进一步揭示其抗肿瘤机制，我们利用基因芯片研究了NC治疗肝癌后一些相关基因表达的改变，了解NC在基因调控网络中的影响，以期筛选NC的相关作用靶点，更全面探讨NC针对肝癌的作用机制。

1 材料与方法

1.1 材料 NC由广西中医药研究院赖茂祥研究员分离提纯(纯度＞95%)，Human OneArray表达谱芯片由上海康成生物工程有限公司提供(Phalanx array);TRIzol试剂、Super ScriptryⅡRNase逆转录酶、dNTP:美国Invitrogen;cDNA标记试剂盒、NucAway柱:Ambion公司;单荧光标记CyDye:Amersham;EB:Sigma公司;DEPC:Amresco公司;琼脂糖:加拿大BBI公司;RNA later:华氏生物技术有限公司;氯仿、异丙醇、无水乙醇:广州新港公司;cDNA合成试剂盒、SYBR Green qPCR Kit:TaKaRa;PCR扩增引物为TaKaRa公司产品。

1.2 基因芯片检测

1.2.1 标本处理 基因芯片分析所用的肿瘤组织样品为本课题组前期建立的肝癌HepG2裸小鼠移植瘤模型［1］，NC 2.5、5 和 10 mg·kg－1剂量对肝癌HepG2的抑制率分别为 12.06%、35.63%和60.91%［1］。生理盐水组和NC高剂量组各取瘤块，生理盐水冲洗。切至厚度在0.5 cm以下，长约1 cm，放入装有5倍体积RNA later的冻存管中。4℃孵育过夜，然后转入－20℃中保存待用。

1.2.2 总RNA样品制备及双链cDNA合成 TRIzol法抽提肝癌组织标本总RNA，采用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测总RNA质量、样品浓度及总量，获得的RNA溶液保存于－80℃。以纯化后的RNA为模板，根据cDNA合成试剂盒的操作手册合成cDNA的第1链和第2链。……