氧化苦参碱抑制脂多糖所致小胶质细胞炎性因子分泌的实验研究

董晓巧 杜 权 俞文华 张祖勇 朱 强 车志豪 陈 锋 王 昊 陈 军杭州市第一人民医院 杭州 310006

氧化苦参碱是从豆科植物苦参、苦豆子等中分离出来的生物碱，属于四环的喹嗪啶类，具有抗炎作用[1-3]。但有关氧化苦参碱对体外培养小胶质细胞炎性因子分泌的影响研究少见报道。本研究观察氧化苦参碱对脂多糖所致小胶质细胞白介素-1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和白介素-6（IL-6）分泌的影响，从细胞水平探讨氧化苦参碱的抗炎作用。

1 材料与方法

1.1 材 料 BV-2细胞购自中国医学科学院协和医科大学基础医学细胞中心，氧化苦参碱购自陕西慧科植物开发有限公司，脂多糖购于美国sigma公司，IL-1β、TNF-α 和 IL-6 ELISA 试剂盒购自美国R&D systems公司。

1.2 分 组 设对照组、药物组、脂多糖组及氧化苦参碱小、中、大剂量组，按 30 min、1 h、3 h 和 6 h 四个时间点分设4个亚组。对照组为BV-2细胞常规培养，药物组为BV-2细胞常规培养加氧化苦参碱培养（氧化苦参碱终浓度为20 μg/mL），脂多糖组为BV-2细胞常规培养加脂多糖培养（脂多糖终浓度为1 μg/mL），小、中、大剂量组为 BV-2 细胞常规培养加小、中、大剂量氧化苦参碱培养（氧化苦参碱终浓度为 1、10、20 μg/mL）30 min，再加脂多糖培养（脂多糖终浓度为 1 μg/mL）。

1.3 细胞培养 细胞接种于血清灭活的DMEM培养液（含10%胎牛血清，1×105IU/L青霉素，l00 g/L链霉素），置于37℃、5%CO2细胞培养箱中培养，每2～3天更换新鲜培养液，传代培养。将BV-2细胞按每孔2×104个细胞接种于96孔细胞培养板，每孔体积200μL，每组设定6个重复孔，镜下观察，待细胞进入对数生长期，弃去孔内陈旧培养液，加入无血清的新鲜DMEM培养液培养2h使细胞周期同步化。……