NK4基因转染对人宫颈癌细胞CaSki生物学特性的影响

王晓黎，王冬冬，赖亚新，林蓓

（中国医科大学1.附属第一医院内分泌科，沈阳 110001；2.附属盛京医院妇产科，沈阳 110004）

宫颈癌是妇科三大恶性肿瘤之一，严重威胁全球女性的健康与生命［1］。随着人乳头瘤病毒感染的蔓延和播散，宫颈癌的发病年龄已出现明显的年轻化趋势，目前的治疗方案以手术和放射治疗为主，但中晚期患者治愈率很低。因此，研究宫颈癌的治疗新策略显得尤为重要。

NK4（an N-terminal hairpin domain and a four-Kringle domain of hepatocyte growth factor）是通过对重组人肝细胞生长因子（hepatocyte growth factor，HGF）进行消化裂解后得到的一种多肽产物，它由HGF的a链N末端的447个氨基酸和4个Kringle区域所组成，故命名为 NK4，分子量为 50 kDa［2］。NK4可以与c-Met结合，竞争性地完全抑制HGF和c-Met的相互作用，影响HGF/c-Met通路的信号转导，从而抑制HGF诱导的细胞增殖、运动和形态形成等作用，但其本身不能诱导c-Met的酪氨酸磷酸化而使其活化。NK4与血管抑制剂—血管抑素的结构具有显著的相似性，有很强的抗血管生成作用［3］。体外研究证实，NK4可抑制HGF诱导包括人胆囊癌、胆管癌、乳腺癌、前列腺癌及胰腺癌等细胞的运动和侵袭［4～7］。为了研究NK4在宫颈癌中的作用，本研究通过转染NK4基因表达质粒，研究了它对宫颈癌细胞CaSki生物学特性的影响。

1 材料与方法

1.1 细胞培养

宫颈癌细胞株Caski培养在含10%新生牛血清、100 IU/mL青霉素、0.1 mg/mL链霉素的RPMI 1640培养基中，置37℃、5%CO2孵箱中培养。

1.2 基因转染

将NK4基因表达序列插入pCMV-IRES-bsr质粒的SmaI位点，构建pCMV-NK4-IRES-bsr质粒，同时构建pCMV-LUC（荧光霉素）-IRES-bsr质粒作为对照。用标准的磷酸钙沉淀方法转染CaSki细胞。经过4周的荧光霉素筛选得到NK4稳定表达的CaSki/NK4细胞株和CaSki/LUC对照细胞株。……