亚洲带绦虫六钩蚴Ta 8基因的克隆表达及免疫原性分析＊

王 宇，程金芝，黄 江，戴佳琳，陈小睿，廖兴江

2.贵州省疾病预防控制中心，贵阳 550004

至20世纪70年代以来，在我国台湾地区、东南亚地区和我国大陆地区相继报道了一种带绦虫，其成虫特征几乎和牛带绦虫一致，而囊尾蚴又与猪带绦虫极为相似。这种带绦虫的中间宿主是猪，人因生食猪肝等内脏而感染。这种带绦虫被命名为亚洲带绦虫［1］。近年来的研究证实在贵州省都匀地区存在亚洲带绦虫病的流行［2］。但是由于传统的病原学方法诊断该病较困难，尤其易与牛带绦虫混淆，使免疫学方法以其费用低廉、操作简单、特异性高等特点成为目前诊断中的重要辅助诊断手段，其中筛选特异性好、敏感性高的诊断抗原成为免疫学诊断技术研究的关键。本研究通过构建p ET－28a（＋）－Ta8原核表达载体，并对其原核表达产物进行纯化和免疫学初步研究。筛选具有免疫原性和潜在诊断价值的候选抗原基因，为绦、囊虫病免疫诊断方法的建立奠定基础。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 标本来源，质粒，菌株 虫体标本采自亚洲带绦虫流行区贵州省都匀市米秀乡；原核表达质粒p ET－28a（＋）和大肠杆菌BL21/DE3由中山大学热带病重点实验室惠赠。

1.1.2 主要试剂和工具酶 TRIzol试剂购自美国Invitrogen公司，逆转录试剂盒（PrimeScriptTMRT reagent Kit）购自日本Ta KaRa公司，Ex Taq酶、EcoR I、HindⅢ、DNA标准（DL15 000、DL2 000）均购自大连宝生物工程公司，T4 DNA连接酶、异丙基－β－D－硫代半乳糖苷（IPTG）均购自美国 Promega公司，Ni－IDA Agarose（Cat.No.30210）购自德国NOVEGN公司，兔抗鼠Ig G试剂盒购自武汉博士德生物工程有限公司，质粒提取试剂盒购自广州东盛科技公司，低分子量蛋白分子量标准购自立陶宛Fermentas公司，DNA凝胶回收试剂盒购自广州铂尔生物科技公司。……