幽门螺杆菌临床菌株克拉霉素耐药性及耐药基因突变位点分析＊

司书梅，张 涛，陈峥宏，王 菲，吴晓娟，綦廷娜，杨廷秀

2.贵阳市第一人民医院，贵阳 550004

幽门螺杆菌（Helicobacterpylori，Hp）是一种 常见的可持续感染人体胃黏膜的病原体。Hp的感染与慢性胃炎、消化性溃疡、胃癌以及MALT淋巴瘤的发生密切相关，克拉霉素是根除Hp治疗方案中常用抗生素之一。近年来发现，Hp对克拉霉素的耐药性逐年增高，因而了解之有利于临床科学地选择抗菌药物。研究发现，Hp23S r RNA V区上的点突变，与克拉霉素耐药性的产生有关。特对贵阳地区Hp临床耐药菌株的23S r RNA基因突变的特征进行检测。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 质控菌株Hp菌株NCTC l l637，SS1，获赠于中国疾病预防控制中心传染病预防控制所。

1.1.2Hp临床菌株来源 临床标本来自贵阳市第一人民医院消化科内镜室胃镜检查病人（慢性胃炎 、胃溃疡 、十二指肠球部溃疡）。

1.1.3 引物 采用 Primer blast设计引物，primer1－F：5′－TGGCGTAACGAGATGGGAGCTGT －3′和 primer1－R：5′－AGTCTTTGTGCGAGCTTAGGGA－3′，扩增Hp23S r RNA基因功能区V区（2055～2889）片段。

1.1.4 试剂 哥伦比亚培养基（上海博微生物科技有限公司，批号100724），幽门螺杆菌添加剂（英国，OXOID），MH培养基（杭州天和微生物试剂，批号110105），克拉霉素（中国食品药品检定研究院，批号130558－200902），2×Taq PCR Master MIX（北京天根生化科技有限公司），微需氧产气袋（日本，三菱化学株式会社），厌氧罐（日本，三菱化学株式会社），细菌基因组DNA提取试剂盒（北京三博远志生物技术有限公司）。

1.2 方法

1.2.1Hp的分离培养和鉴定 无菌操作，将活检组织剪碎迅速接种于哥伦比亚血琼脂培养基，微需氧环境，37℃培养3～6 d。将疑似菌株经革兰染色初步鉴定后划线分离培养，挑取单菌落传代培养，经革兰染色、快速尿素酶试验和Hp16S rDNA特异性PCR扩增［1］进行鉴定，将Hp阳性菌株于绵羊血中－80℃保存。……