霍乱弧菌O139胶体金免疫层析快速检测法的建立

王玉金，杨书豪，刘 丽，庞向宇，孙晨阳，李珊珊

霍乱（Cholera）是由霍乱弧菌（Vibriocholerae）所引起的烈性肠道传染病，它和鼠疫、黄热病一起，被世界卫生组织（WHO）规定为必须实施国际卫生检疫的三种传染病之一，在中国属法定管理的两种“甲类”传染病之一。霍乱是一种重要的急性肠道传染病，以发病急、传播快、波及范围广、能引起大流行为特征。霍乱病原菌包括O1群和O139群。人类历史上已有的七次霍乱大流行，均由O1群霍乱弧菌引起。自1992年起，印度和孟加拉国先后发生O139霍乱，并造成广泛传播，我国也有O139霍乱的爆发或输入性病例［1］。尽早快速诊断该病原体，对于迅速控制传染源、减少病死率具有重要意义。常规的分离技术包括增菌、培养、生化和血清学鉴定，需要时间较长，不适合口岸现场检测。采用霍乱弧菌O139群的特异性单克隆抗体开发的胶体金试纸条，可快速、简便、准确地检测霍乱弧菌［2］。本研究应用双抗体夹心法及胶体金免疫层析法制备霍乱弧菌O139群胶体金免疫层析试纸条，简便快速，并与常规培养法结果进行对比分析，其特异性和灵敏度均较好。

1 材料与方法

1.1 材料 所有菌株均由中国医学细菌保藏管理中心和中国疾病预防控制中心传染病预防控制所卫生部医学分子细菌学重点实验室提供；抗霍乱弧菌O139群单抗 由本所细胞室提供，3H2用于标记，2G8用于包被；兔抗鼠IgG由本所细胞室制备，血清双向琼脂扩散效价≥1∶64；氯金酸（HAuCl4·4H2O）Sigma公司产品；硝酸纤维素微孔滤膜（NC）美国Millipore公司产品。

1.2 胶体金标记物的制备