白细胞介素1α对人永生化角质形成细胞、水通道蛋白3表达的调节

闫学文，单士军

（1.天津市中医药研究院附属医院，天津300120；2.天津医科大学总医院，天津 300154）

中波紫外线（ultraviolet B,UVB）照射后，角质形成细胞（keratinocyte cell,KC）产生多种细胞因子，其中白细胞介素 1α（interleukin-1α,IL-1α）与皮肤光老化的作用极为密切。作为一种前炎症介质，IL-1α在UVB急性损伤后直接或间接影响皮肤中的免疫细胞及周围细胞，在免疫调节、炎症发生以及促进组织增生方面起了重要作用[1]。研究表明，水通道蛋白3（aquaporin 3，AQP3）表达于正常皮肤的基底细胞细胞膜，是水和甘油的转运通道。在皮肤炎症、应激或某些慢性疾病以及肿瘤等情况下，AQP3表达发生变化[2]。但IL-1α和AQP3之间的关系尚未见报道。本研究以体外培养的人永生化角质形成细胞（HaCaT）为靶细胞，观察IL-1α处理后HaCaT细胞AQP3 mRNA和蛋白表达的变化。初步探讨其作用机理和临床应用价值。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 细胞株 HaCaT由德国柏林自由大学本杰明·富兰克林医学中心惠赠。

1.1.2 主要试剂细胞培养液和胎牛血清购自美国Hyclone公司。抗人AQP3多克隆抗体由万寅生教授惠赠。Trizol RNA提取试剂为Invitrogen公司产品。总RNA提取试剂盒、cDNA第一链合成试剂盒、RealMasterMix新型荧光定量PCR试剂盒购自北京天根生化科技有限公司。引物由北京赛百盛公司合成。重组人IL-1α购自美国CaliforniaBioscience公司。

1.1.3 引物设计自行设计引物。内参GAPDH，上游引物:5′-TCC TGT GGC ATC CAC GAA ACT-3′；下游引物，5′-GAA GCA TTT GCG GTG GAC GAT-3′；扩增产物313 bp。AQP3，上游引物：5′-GCT GTC ACT CTG GGC ATC CTC-3′；下游引物：5′-GCG TCT GTG CCA GGG TGT AG-3′；扩增产物 133bp。

1.2 主要仪器设备 细胞培养超净台（蚌埠净化设备厂）、CO2培养箱（Queue SystemsTM2711美国）、倒置相差显微镜（OLYMPUS，I×70日本）、全能型高性能台式冷冻离心机（Heaeus,Biofuge Stratos德国）、深低温冰箱（SANYO，Altra Low日本）、蒸汽高压消毒箱（Tuttnauer,2540 MK美国）、550型酶标……