白细胞介素4对体外培养人黑素细胞增殖及黑素合成的影响

陈静宇 ，林新瑜 ，王芳 ，林鸿刚

（1.成都市第六人民医院，成都610051；2.四川省医学科学院·四川省人民医院，成都610072；3.四川大学国家生物治疗重点实验室，成都 610041）

黄褐斑、白癜风等是临床上常见的色素障碍性疾病，目前其发病机制还不十分清楚,治疗难度也较大。皮肤颜色的深浅主要取决于黑素细胞产生黑素的量和分布。通过黑素细胞的体外纯培养可以研究色素障碍性疾病的发病机制，筛选治疗这些疾病的药物和方法。本研究建立正常人表皮黑素细胞体外培养体系，采用不同浓度的白细胞介素 4（interleukin-4，IL-4）作用于体外培养的黑素细胞，观察其对黑素细胞增殖及黑素合成的影响，为临床应用IL-4治疗色素性疾病提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 材料及仪器 MCDB-153培养基，牛胰岛素，人转铁蛋白，左旋多巴（levodopa,L-Dopa），IL-4，二甲基亚砜（DimethylSulphoxide），MTT均购自美国Sigma公司。重组人表皮生长因子（recombinant human epidermal growth factor,rhEGF）购于美国Peprotech公司。牛垂体提取物（bovine pituitary extract,BPE）购于美国Invitrogen公司。10%新生小牛血清购自Hyclone公司。乙二胺四乙酸二钠（EDTA-Na2）购自美国Gibco公司。氢化可的松0.5 μg/mL，青霉素100 IU/mL，链霉素100 IU/mL，胰蛋白酶，台盼兰均系国产。培养瓶、96孔板和6孔板均购于美国Corning公司。显微镜：观察细胞用的是OLYMPUS CK2型号；细胞计数用的是OLYMPUS CKX41型号，照相用的OLYMPUSCH2型号；酶联免疫检测仪；流式细胞仪。标本经患者知情同意后取自18～35岁行包皮环切术的正常人包皮。

1.2 方法

1.2.1 正常人黑素细胞的培养[1-4]将上述包皮放入含青霉素、链霉素浓度为100 IU/mL的磷酸盐缓冲液（phosphate buffered saline，PBS）中，取出后在超净台上用组织剪剪去皮下组织，再用PBS液反复彻底冲洗。移入含0.2 g/L EDTA-Na2的0.25%胰蛋白酶约20 mL的无菌瓶中，盖紧，于4℃冰箱中消化18～24 h。……