大黄素对肠黏膜屏障损伤的保护作用及机制研究

白小武，嵇 武，丁博文，张 强，李秋荣，李 宁

(本文编辑:潘雪飞; 英文编辑:王建东)

肠缺血再灌注(IR)是临床多种疾病的病理生理过程，进一步发展可以导致全身炎症反应综合征(SIRS)和多器官功能障碍综合征(MODS)等的发生。研究表明大黄素对肠缺血再灌注损伤有保护作用，故本实验采用大鼠肠缺血再灌注模型，观察大黄素对肠缺血再灌注肠黏膜细胞凋亡及紧密连接破坏的影响，探讨大黄素保护肠黏膜屏障的机制，为临床治疗肠缺血再灌注提供理论依据，现将研究结果报告如下。

1 材料与方法

1.1 动物 雄性健康清洁级SD大鼠48只，8～9周龄，体重200～250 g，由南京军区南京总医院比较医学科提供，实验动物使用许可证号:SYXK(军)2007-029;饲养室温度22～23℃，环境湿度50%，喂以标准的大鼠饮食。

1.2 药物与试剂 大黄素购于中国药品生物制品检定所;兔抗大鼠Claudin-1抗体和Occludin抗体购于Santa Cruz公司;脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的末端标记法(TUNEL)染色试剂盒、山羊抗兔IgG-HRP二抗、牛血清白蛋白(BSA)购于南京碧波生物科技有限公司;β-actin抗体购于北京博奥森生物技术有限公司;考马斯亮蓝蛋白浓度试剂盒购于南京建成生物工程研究所;全蛋白酶抑制剂混合片购于罗氏公司;Western Blot上样缓冲液购于Fermentas公司。

1.3 主要实验仪器 JEM-1010透射电子显微镜(日本电子株式会社)。

1.4 动物分组及模型制作 48只SD大鼠正常喂养1周后随机分为假手术(S)组、模型(IR)组、模型+生理盐水(IRS)组和模型+大黄素(IRE)组，每组12只。大黄素用生理盐水配制成10 g/L的混悬液备用。IRE组按40mg/(kg·d)剂量给予大黄素灌胃，IRS组给予等量的生理盐水灌胃，两组均为1次/d，连续7 d。……