喷他脒对人卵巢癌CAOV3细胞的抑制作用研究

吴岩印，张明月，丁 虹，孙国栋，唐艳超，杨 敏，范茂丹

(本文编辑:张仲书; 英文编辑:王建东)

喷他脒是一种抗肺孢子虫类药物，国外研究报道喷他脒对肿瘤细胞亦有杀伤抑制作用［1］。喷他脒通过双重抑制细胞有丝分裂蛋白和肝再生磷酸酶－2(phosphatase of regenerating liver，PRL－2)，降低肿瘤生长活性，减少肿瘤新生血管生成，使细胞丧失增殖能力。本研究通过观察不同浓度的喷他脒对上皮性卵巢癌CAOV3细胞株的影响，探讨其抗肿瘤的可能性。

1 材料与方法

1.1 实验材料 ①卵巢癌CAOV3细胞株(由浙江大学医学院附属妇产医院赠送);②喷他脒(批号:X02040000217，河南新乡制药公司)。

1.2 仪器与试剂 噻唑蓝(MTT)(Sigma)，二甲基亚砜 (dimethyl sulfoxide，DMSO)(Sigma)，RPMI－1640培养液 (Thermo)，胎牛血清(Gibco)，CO2细胞培养箱(Thermo Scientific HERA)。

1.3 实验方法

1.3.1 细胞培养 用含10%灭活小牛血清、青霉素100IU/ml和链霉素100IU/ml的RPMI－1640培养液培养细胞，置37℃、5%CO2培养箱内，用0.02%乙二胺四乙酸(EDTA)消化传代，选用对数生长期细胞，调整细胞悬液浓度，分别于96孔板，每孔加100 μl，5000 ～6000 个/孔。置 37℃、5%CO2恒温箱培养24 h。

1.3.2 喷他脒储存液的配制 称取喷他脒300 mg，加入5 ml二甲基亚砜，－20℃ 保存备用。

1.3.3 在细胞样品中加入不同浓度的喷他脒 实验组分别为喷他脒 0.10 μmol/L、1.00 μmol/L、10.00 μmol/L、100.00 μmol/L 组，同时设置空白组(培养基、MTT、DMSO)，对照组(细胞、喷他脒溶解介质、培养液、MTT、DMSO)，每组6个复孔，并分别培养 24 h、48 h、72 h。小心吸去上清，加入80 μl新鲜RPMI 1640培养液，再加入20μl MTT溶液，继续培养4 h。吸掉上清，每孔加入150μl DMSO，置摇床上低速振荡10 min，使结晶物充分溶解。使用酶标仪测定492 nm处各孔的吸光值。

1.3.4 计算抑制率 抑制率 =［(对照组 －空白组)－(实验组－空白组)］/(对照组－空白组) ×100%。

1.4 统计学处理 采用SPSS 16.0软件包进行统计分析，检测数据以均数±标准差表示，以P＜0.05为差异有统计学意义。……