西伯利亚鲟热休克蛋白HSP70 cDNA的克隆、序列分析和组织分布

田照辉，徐绍刚，王巍，胡红霞，董颖，宋超

(国家淡水渔业研究中心暨北京市水产科学研究所，北京 100068)

热休克蛋白(Heat shock proteins，HSPs)又称应激蛋白，其中HSP70家族高度保守，当机体遭受应激后会被诱导而迅速表达。HSP70具有分子伴侣功能，可以提高机体对应激因子的抵抗能力，在免疫过程中具有重要作用[1-6]。热休克蛋白因具有广泛的生物学功能而成为研究热点。一些学者对黄颡鱼、团头鲂、剑尾鱼等多种鱼类的HSP70基因进行了克隆和研究[5-9]，还有学者建议将HSP70的表达作为潜在性的环境应激和毒性量化指标[10]。

西伯利亚鲟Acipenserbaerii属鲟形目、鲟科、鲟属,为亚冷水性鱼类。该鱼的养殖利润较高，因而成鱼养殖得到迅速推广。在成鱼养殖过程中，养殖户的盲目选址以及为追求产量加大鲟的放养密度，由此而引起的拥挤胁迫和夏季水温过高引起的高温胁迫时有发生，致使西伯利亚鲟抗病力下降，病害增加。本研究中，作者首次克隆了西伯利亚鲟HSP70 cDNA的全长，并对其在各组织中的分布进行了分析，旨在为研究HSP70在西伯利亚鲟抗应激过程中的作用和机理奠定基础。

1 材料与方法

1.1 材料

试验用西伯利亚鲟取自北京市水产科学研究所国家级鲟鱼良种场， 其中1尾(150 g)用于基因克隆试验，3尾(165 g±23.46 g)用于组织分布试验。

RNeasy mini kit提取试剂盒和RNase-Free DNase Set为Qiagen公司产品；Trizol Reagent、DNaseI、RT-PCR试剂盒购于Invitrogen公司；ExTaq、SMART RACE cDNA Amplification Kit(Clontech)和pGM-19T Vector载体连接试剂盒购自TaKaRa公司；胶回收试剂盒为Axygen公司产品；实时定量试剂为AB公司生产的2×Sybrgreen PCR Master Mix。克隆菌株DH10B由北京市水产科学研究所生物技术与育种研究室保存。……