先天性巨结肠患儿结肠肌间神经丛内神经节细胞中NKX2-1的表达

陈 琦，王 志，曹振杰，赵金磊，冯伟楼

郑州大学第三附属医院小儿外科 郑州 450052

先天性巨结肠(Hirschsprung’s disease，HD)是新生儿期低位肠梗阻的常见原因之一，其病因尚不十分明确。研究[1]表明在整个神经系统的发育中都存在NKX2-1的合成。近年来NKX2-1的研究主要集中在甲状腺、脑部以及肺部等有关神经系统发育疾病过程[2]，在肠神经的研究较少。作者应用免疫组化SP法和RT-PCR技术检测NKX2-1在HD患儿结肠壁肌间神经丛内神经节细胞中的表达，进一步了解NKX2-1在HD发病中的作用机制。

1 材料与方法

1.1 标本来源 郑州大学第三附属医院普外科2010年9月至2011年4月临床确诊HD手术患儿30例，其中男21例，女9例。年龄3 d至5岁，中位年龄13个月。长段型4例，常见型19例，短段型7例。分别取患儿结肠的狭窄段、移行段和扩张段用于实验。同时取30例肠套叠手术患儿切除的正常结肠标本作为对照，其中男19例，女11例，年龄4个月至2岁，中位年龄14个月。

1.2 NKX2-1蛋白的检测

1.2.1 试剂及方法 采用免疫组化SP染色法检测。所有标本均经中性甲醛溶液固定，石蜡包埋、切片，2 μm厚连续切片。一抗为鼠抗人单克隆抗体(稀释200倍后使用)，由北京博奥森生物技术有限公司提供，二抗和DAB显色剂购于北京中杉金桥生物技术服务有限公司，染色步骤严格按说明书进行。

1.2.2 结果判定 用Leica病理图像采集仪器采集图像，每例标本随机选取肠壁全层10个高倍视野，观察肌间神经丛和黏膜下神经丛的染色情况，以结肠神经节细胞胞质内出现特异性棕黄色颗粒为阳性。参照文献[3]的标准:未着色为阴性(－)、偶见着色为弱阳性(+)、中等着色为阳性(⧺)、着色丰富为强阳性(⧻)。……