色满卡林对培养乳鼠心肌细胞H／R损伤的保护作用研究

祝春梅，王国贤，张 涛

（1.辽宁医学院附属第一医院，2.辽宁医学院药理学教研室，辽宁 锦 州121000）

色满卡林（CRK）是传统的钾通道开放剂，具有舒张血管、降低血压、保护心脏的作用，用于高血压和心肌缺血的治疗，但其作用机制尚未完全阐明［1－3］。本研究在建立原代培养大鼠乳鼠心肌细胞H／R损伤模型的基础上，观察CRK对受损心肌细胞的保护作用，并对其作用机制进行探讨。

1 材料与方法

1.1 材料 实验动物：选用出生2－3 d的SD大鼠乳鼠，雌雄不拘，由辽宁医学院实验动物中心提供，动物合格证号：SCXK（辽）2003－0008。主要设备：CO2孵育箱、全自动生化分析仪、倒置显微镜、79－1磁力加热搅拌器、JY2型超声细胞粉碎仪、721紫外分光光度计、流式细胞仪。主要试剂：CRK（Sigma）、DMEM 培养基（Gibco）、新生牛血清（北京华美生物工程公司）、LDH检测试剂盒（南京建成生物工程研究所）、Annexin V－FITC凋亡检测试剂盒（北京宝赛生物技术有限公司）、Caspase－3抗体（Cell Signaling公司），其余试剂均为国产分析纯。

1.2 心肌细胞分离培养 取出生2－3 d的SD大鼠乳鼠，无菌条件下，开胸剪取心脏，剪成1 mm3的小块后用0.08%胰蛋白酶消化液消化10 min，重复以上过程4－6次，1 000 r／min离心10 min后弃上清，加入含15%小牛血清的DMEM培养基混悬沉淀的细胞，置入CO2孵箱，37℃条件下培养2 h，以差速贴壁分离法纯化心肌细胞。调整细胞浓度至1×106个／ml，接种到培养瓶内，常规培养，第三天加药。

1.3 心肌细胞H／R损伤模型的制备 缺氧：将细胞置入37℃、95%N2＋5%CO2饱和的细胞培养箱培养2 h；复氧：将细胞置入37℃、5%CO2饱和的细胞培养箱中继续培养30 min。

1.4 实验分组 将常规培养3 d的心肌细胞分为5组：①正常对照组：细胞正常培养，不施加任何处理因素；……